TNFSF15、VEGF及Survivin在肺腺癌中的表達(dá)及臨床病理特征的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　本研究通過(guò)檢測(cè)NSCLC組織中TNFSF15、VEGF及Survivin的表達(dá)情況，分析它們之間及其與患者相關(guān)臨床病理資料間的相關(guān)性，探討三種因子作為判斷NSCLC遠(yuǎn)期預(yù)后指標(biāo)的可行性。
　　方法：
　　一、組織標(biāo)本與患者資料
　　選擇2007年9月至2009年6月于天津市第一中心醫(yī)院胸外科行手術(shù)治療的非小細(xì)胞肺癌患者150例（腺癌75例，鱗癌75例，相應(yīng)癌旁組織各75例），所有患者術(shù)前均未行放化療。

2、其中鱗癌患者資料為:男69例.女6例，年齡31～77歲，平均61歲;中低分化為70例，高分化5例;腫瘤長(zhǎng)徑≤5cm為47例，＞5cm為28例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，N046例，N1+N229例;pTNM分期(UICC2009標(biāo)準(zhǔn)):Ⅰ+Ⅱ期52例，Ⅲ期23例;75例患者經(jīng)隨訪3-5年，死亡20例，死亡患者生存時(shí)間為8-48個(gè)月。腺癌患者資料為:男40例.女35例，年齡25～84歲，平均58歲;中低分化為62，高分化13例;腫瘤長(zhǎng)徑≤5cm為5

3、8例，＞5cm為17例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，N038例，N1+N237例;pTNM分期:Ⅰ+Ⅱ期57例，Ⅲ期18例;75例患者經(jīng)隨訪3-5年，死亡22例，死亡患者生存時(shí)間為1-40個(gè)月。
　　二、標(biāo)本采集與分組
　　分別將鱗癌、腺癌標(biāo)本及對(duì)應(yīng)癌旁組織制作成兩組150個(gè)點(diǎn)位的組織芯片（上海芯超）行進(jìn)一步研究，將鱗癌及腺癌組織標(biāo)本作為研究組，癌旁正常肺組織標(biāo)本（距腫瘤組織2cm以上，病理確認(rèn)無(wú)腫瘤細(xì)胞）作為對(duì)照組（實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中部分

4、芯片點(diǎn)位存在脫片情況，實(shí)際標(biāo)本數(shù)量可能少于150例）。
　　三、免疫組織化學(xué)及免疫熒光染色
　　對(duì)兩組組織芯片標(biāo)本，采用SP免疫組織化學(xué)方法進(jìn)行染色，檢測(cè)VEGF和Survivin在150例NSCLC組織及癌旁組織中的表達(dá)，通過(guò)免疫熒光方法檢測(cè)TNFSF15在組織芯片中的表達(dá)情況，分析TNFSF15、VEGF及Survivin與患者各臨床病理參數(shù)及三者之間的關(guān)系。
　　VEGF、Survivin免疫組化陽(yáng)性結(jié)果的判定標(biāo)

5、準(zhǔn)為:光鏡視野下計(jì)數(shù)400個(gè)細(xì)胞，將免疫染色的強(qiáng)度(0=negative，1=weak，2=moderate，3=strong)和免疫染色的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)(0=absent，1=1～25％，2=26～50％，3=51～75％，4=≥76％)兩項(xiàng)評(píng)分相乘所得到的分?jǐn)?shù)作為每例標(biāo)本的最終分?jǐn)?shù)，＜2分為陰性，≥2分為陽(yáng)性。
　　TNFSF15的表達(dá)情況通過(guò)Image J軟件在相同條件設(shè)置下進(jìn)行半定量分析，計(jì)算腫瘤組織及癌旁組織總的熒光表達(dá)面積

6、及強(qiáng)度，計(jì)算出每個(gè)標(biāo)本的平均熒光強(qiáng)度，分別計(jì)算鱗癌及腺癌癌旁組織標(biāo)本熒光強(qiáng)度的均數(shù)，將鱗癌及腺癌標(biāo)本中低于癌旁組織熒光強(qiáng)度均數(shù)的病例定義為低表達(dá)，而高于均數(shù)的病例則被定義為高表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　一、VEGF、Survivin及TNFSF15在NSCLC中的表達(dá)位置
　　VEGF蛋白均表達(dá)于胞質(zhì)內(nèi)，Survivin蛋白在NSCLC腫瘤細(xì)胞及癌旁正常細(xì)胞胞質(zhì)和胞核內(nèi)均存在表達(dá)，而TNFSF15則表達(dá)于組織血管內(nèi)皮細(xì)胞的

7、胞膜及胞質(zhì)內(nèi)。
　　二、VEGF、Survivin及TNFSF15在NSCLC中的表達(dá)情況及其與相關(guān)臨床病理特征的相關(guān)性
　　VEGF、Survivin在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)均明顯高于相應(yīng)癌旁正常組織，而TNFSF15在腫瘤血管內(nèi)皮組織中的表達(dá)則顯著低于癌旁正常組織。
　　肺鱗癌組織中VEGF陽(yáng)性表達(dá)為64/75(85.3％)，癌旁組織為18/64(28.1％)(P=0.00)，肺鱗癌組織中Survivin陽(yáng)性的比

8、例為69/74(93.2％)，癌旁組織為6/63(9.5％)(P=0.00)，肺鱗癌組織中VEGF和Survivin的表達(dá)明顯高于癌旁組織。而在肺腺癌組織中VEGF陽(yáng)性表達(dá)為61/70(87.1％)，癌旁組織為22/60(36.7％)(P=0.00)，肺腺癌組織中Survivin陽(yáng)性的比例為63/71(87.3％)，癌旁組織為4/66(6.1％)(P=0.00)，肺腺癌組織中VEGF和Survivin的表達(dá)亦顯著高于癌旁組織。在NSCL

9、C組織中，VEGF陽(yáng)性表達(dá)為123/145(84.8％)，癌旁組織為40/124(32.3％)(P=0.00)，Survivin陽(yáng)性的比例為132/143(92.3％)，癌旁組織為10/129(7.8％)(P=0.00)，因此NSCLC組織中VEGF和Survivin的表達(dá)均明顯高于癌旁組織。
　　TNFSF15在肺鱗癌組織中的平均免疫熒光強(qiáng)度為0.0544±0.0009(73)，而癌旁組織中的平均熒光強(qiáng)度則為0.0551±0.0

10、008(72)，二者存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.00)。TNFSF15在肺腺癌組織中的平均免疫熒光強(qiáng)度為0.0541±0.0007(69)，而癌旁組織中的熒光強(qiáng)度則為0.0545±0.0009(62)，二者亦存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.00)。TNFSF15在NSCLC組織中的平均免疫熒光強(qiáng)度為0.0543±0.0008(142)，而癌旁組織中的熒光強(qiáng)則為0.0548±0.0009(134)，二者差異顯著(P=0.00)，癌旁組織中TNFSF1

11、5的表達(dá)要顯著高于腫瘤組織。
　　NSCLC組織中VEGF、Survivin及TNFSF15蛋白在患者不同年齡、性別、腫瘤直徑、分化程度、臨床分期中的表達(dá)均無(wú)顯著差異，且Survivin在鱗癌有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的表達(dá)差異不顯著(P=0.76)，而在腺癌患者有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中Survivin的表達(dá)水平顯著升高(P=0.01)。
　　三、NSCLC中VEGF、Survivin與TNFSF15的相關(guān)性
　　采用Spearman

12、秩相關(guān)檢驗(yàn)顯示，NSCLC中VEGF與Survivin的表達(dá)存在正相關(guān)(R=0.339，P=0.01);而VEGF的表達(dá)與TNFSF15則呈負(fù)相關(guān)(R=-0.555，P=0.03);Survivin的表達(dá)與TNFSF15的表達(dá)亦存在負(fù)相關(guān)(R=-0.2539，P=0.01)。
　　四、不同pTNM分期NSCLC患者的生存分析
　　分別對(duì)不同pTNM分期肺鱗癌及腺癌患者進(jìn)行3-5年隨訪，去除無(wú)臨床分期病例和失訪病例，鱗癌組剩余

13、73個(gè)病例。應(yīng)用GraphPad Prism5.01軟件進(jìn)行生存分析，并采用Log Rank法統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，顯示不同pTNM分期鱗癌患者之間生存率存在顯著差異(P=0.01)。
　　腺癌患者去除無(wú)臨床分期病例和失訪病例，剩余58個(gè)病例，應(yīng)用以上方法行生存分析，顯示不同pTNM分期腺癌患者之間生存率亦存在顯著差異(P=0.00)。而將鱗癌組與腺癌組行對(duì)比分析顯示，鱗癌與腺癌兩組總體生存率(P=0.42)、Ⅰ期病例(P=0.42)及Ⅲa期

14、手術(shù)病例生存率(P=0.83)均無(wú)顯著差異。
　　以上結(jié)果顯示，本研究所選取樣本的生存時(shí)間較為客觀真實(shí)，為進(jìn)一步進(jìn)行單因素及多因素生存分析提供了依據(jù)和基礎(chǔ)。
　　五、NSCLC中VEGF、Survivin及TNFSF15表達(dá)水平與生存時(shí)間的相關(guān)性
　　NSCLC病例中VEGF陰性表達(dá)(20例)與陽(yáng)性表達(dá)(125例)組患者生存時(shí)間無(wú)顯著差異(P=0.23)。而Survivin陰性表達(dá)(13例)組患者生存時(shí)間則高于陽(yáng)性表達(dá)

15、組患者（132例），兩組生存時(shí)間存在差異(P=0.04)。在可確切測(cè)定平均熒光強(qiáng)度的142例NSCLC組織標(biāo)本中，相對(duì)低表達(dá)組74例患者的生存時(shí)間低于高表達(dá)組患者，兩組生存時(shí)間存在差異(P=0.04)。
　　六、多因素生存分析及COX回歸
　　應(yīng)用多變量分析及Cox回歸對(duì)患者所有的臨床病理特征進(jìn)行分析，相關(guān)變量包括性別、年齡、病理類型、病理分級(jí)、腫瘤大小、病變側(cè)別、腫瘤部位、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、VEGF，Survivin及TNFSF

16、15的表達(dá)情況，結(jié)果顯示Survivin的陽(yáng)性表達(dá)(HR0.122;95％ CI0.015-0.979; P=0.04)，TNFSF15的低表達(dá)(HR0.418;95％ CI0.196-0.889; P=0.02)及多枚淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(HR0.317;95％ CI0.131-0.769;P=0.01)與患者的生存時(shí)間存在顯著相關(guān)性。因此，TNFSF15的低表達(dá)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上可作為獨(dú)立預(yù)測(cè)NSCLC患者預(yù)后的指標(biāo)。
　　結(jié)論：
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