ABCB5通過(guò)IL-1β介導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌吉西他濱化療抵抗的研究.pdf

1、非小細(xì)胞肺癌（Non-small cell lung cancer，NSCLC）是最常見(jiàn)的肺癌類型，患病人數(shù)約占肺癌患者的80％。吉西他濱（gemcitabine，Gem）是治療晚期NSCLC的一線用藥，多藥耐藥（multidrug resistance，MDR）的產(chǎn)生導(dǎo)致化療效果不盡如人意。ATP結(jié)合盒（ATP-binding cassette，ABC）轉(zhuǎn)運(yùn)體家族成員的過(guò)表達(dá)與MDR密切相關(guān)。ABC轉(zhuǎn)運(yùn)體是一類跨膜蛋白，可利用ATP水

2、解供能主動(dòng)地將胞內(nèi)藥物泵出，降低胞內(nèi)藥物濃度從而導(dǎo)致耐藥。ABC轉(zhuǎn)運(yùn)體B家族有11個(gè)成員，多藥耐藥蛋白ABCB5是新近發(fā)現(xiàn)的與 ABCB1（P-glycoprotein，P-gp）同源的轉(zhuǎn)運(yùn)體。研究表明，ABCB5可作為惡性黑色素瘤起源細(xì)胞（malignant melanoma-initiating cells，MMIC）的分子標(biāo)志物，還可介導(dǎo)乳腺癌、肝癌等多種腫瘤細(xì)胞的MDR。而ABCB5在NSCLC中表達(dá)情況如何，是否參與Gem的化

3、療抵抗，目前相關(guān)研究甚少。因此，本研究旨在探索ABCB5在NSCLC中的表達(dá)，并研究ABCB5在Gem產(chǎn)生化療抵抗中的作用及其相關(guān)機(jī)制。
　　第一部分、ABCB5在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)
　　目的：探索ABCB5在NSCLC不同組織類型和細(xì)胞株中的表達(dá)
　　方法：
　　1）組織水平：采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)35例NSCLC腫瘤組織及其癌旁組織中ABCB5的表達(dá)，SPSS法分析比較ABCB5在不同組織類型、病理類型

4、之間的表達(dá)差異。
　　2）細(xì)胞水平：選取5種NSCLC細(xì)胞株HCC827、A549、PC9、H1299、H1975，Western blotting法檢測(cè)NSCLC細(xì)胞中ABCB5的表達(dá)。不同濃度Gem（1.25、2.5、5、10、20、40、80μM）處理48h，MTT法檢測(cè)Gem對(duì)上述5種細(xì)胞的增殖抑制作用，并分析ABCB5蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：
　　1）ABCB5在NSCLC腫瘤組織中高表達(dá)，且明顯高于癌旁

5、組織（P<0.01），在肺腺癌中的表達(dá)強(qiáng)度高于肺鱗癌組織（P<0.05）。
　　2）ABCB5在NSCLC細(xì)胞株中呈不同程度的表達(dá)，HCC827和 H1975細(xì)胞中表達(dá)相對(duì)較高。Gem對(duì)5種NSCLC細(xì)胞均有增殖抑制作用，給予Gem后，各細(xì)胞株的ABCB5蛋白表達(dá)呈不同程度的上調(diào)，其中以 H1975細(xì)胞中ABCB5蛋白上調(diào)最明顯，為給藥前的1.5倍（P<0.01）。
　　結(jié)論：ABCB5在NSCLC腫瘤組織中的表達(dá)程度顯著高

6、于癌旁組織，在NSCLC細(xì)胞株中呈不同程度的表達(dá)，提示ABCB5與NSCLC腫瘤的進(jìn)展與耐藥相關(guān)。Gem可誘導(dǎo)NSCLC細(xì)胞中ABCB5的表達(dá)，提示ABCB5可能參與介導(dǎo)NSCLC對(duì)Gem產(chǎn)生化療抵抗。
　　第二部分、ABCB5通過(guò)IL-1β介導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌吉西他濱化療抵抗
　　目的：研究ABCB5在Gem產(chǎn)生化療抵抗中的作用及其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：MTT法檢測(cè)Gem聯(lián)合小白菊內(nèi)酯（Parthenolide，PTL）

7、對(duì)H1975細(xì)胞存活率的影響；取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期H1975細(xì)胞，分為以下4組：對(duì)照組、Gem單用組、PTL單用組、Gem+PTL聯(lián)合組，采用AnnexinV-FITC/PI雙標(biāo)法，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率；Western blotting法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ABCB5、IL-1β、NF-κB p65蛋白表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　1）與對(duì)照組相比，Gem單用組ABCB5表達(dá)明顯上調(diào)（P<0.01）。與Gem單用組相比，Gem聯(lián)合PTL組顯

8、著下調(diào)ABCB5表達(dá)（P<0.01），H1975細(xì)胞敏感性明顯增加（P<0.01），凋亡細(xì)胞顯著增多（P<0.01）。
　　2）與對(duì)照組相比，Gem單用組IL-1β、NF-κB p65蛋白表達(dá)明顯上調(diào)（P<0.01）。與Gem單用組相比，Gem聯(lián)合PTL組IL-1β、NF-κB p65蛋白表達(dá)被顯著抑制（P<0.01）。
　　結(jié)論：ABCB5可能通過(guò)促進(jìn)IL-1β分泌，進(jìn)而激活NF-κB，介導(dǎo)NSCLC對(duì)Gem產(chǎn)生化療抵抗。