1、目的:建立適用于當歸的ISSR-PCR最佳反應體系,對不同產區(qū)栽培當歸居群進行遺傳多樣性和遺傳結構研究。
方法:采用正交試驗設計和單因素試驗設計對反應體系中各種影響因素進行優(yōu)化,應用優(yōu)化后體系對41個不同居群栽培當歸樣本進行 ISSR-PCR擴增,利用 Popgen1.32軟件分析 Shannon's多樣性信息指數(shù)(I)等遺傳信息參數(shù),應用 NTSYS軟件構建其遺傳距離的 UPGMA聚類圖,并對統(tǒng)計數(shù)據(jù)進行遺傳多樣性和遺傳結構
2、分析。
結果:最佳反應體系(20μL)為:10×PCR Buffer(Mg2+ Plus)2.0 mmol/L,Taq DNA聚合酶1.5 U,dNTPs0.25 mmol/L,Primer0.4μmol/L以及 Template DNA30 ng;篩選出6條擴增條帶較多、背景清晰的引物對41個居群的804個栽培當歸樣品進行 PCR擴增,共檢測到54個位點,其中多態(tài)性位點46個,多態(tài)性比率為85.19％,Shannon's信息
3、指數(shù)(I)平均值為0.4436,Nei's基因多樣度(H)平均值為0.2999;通過 Popgen軟件分析得到栽培當歸居群的 Ht為0.3012,Hs為0.0204,根據(jù) Ht和 Hs來計算 Gst為0.9322,居群間基因流估計值 Nm為0.0364;不同產區(qū)的栽培當歸之間遺傳距離的變異范圍是0.3994-1.0000。
結論:建立的當歸 ISSR-PCR反應體系可用于當歸分子遺傳學研究;各指數(shù)均顯示出甘肅栽培當歸遺傳多樣性
