版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、[目的]
從整體、細胞及分子水平研究炎性因子在糖尿病大鼠周圍神經(jīng)修復(fù)再生中的作用及中藥筋脈通是否能夠通過干預(yù)炎性因子途徑減輕神經(jīng)組織損傷、促進神經(jīng)再生修復(fù),從而減少DPN的發(fā)生。
[方法]
1.動物實驗
將雄性SD大鼠隨機分為正常(Con)組和造模組,造模組采用鏈脲佐菌素(60mg/kg)一次性腹腔注射建立糖尿病大鼠模型。造模成功后隨機分為糖尿病(DM)組、筋脈通(JMT)組、神經(jīng)妥樂平(Ntp)
2、組,每組各10只。成模后予灌胃給藥,JMT和Ntp組分別按成人劑量15倍給藥,Con組和DM組則給予等量蒸餾水灌胃。連續(xù)灌胃16周,測量大鼠機械痛閾值,采用免疫組化、ELISA、WesternBlot等方法觀察DPN大鼠坐骨神經(jīng)組織中IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α等炎性因子及NGF、NT-3等神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達以及中藥筋脈通的干預(yù)作用。
2.細胞實驗
采用組織貼塊法體外培養(yǎng)乳鼠坐骨神經(jīng)雪旺細胞(SCs)
3、,設(shè)置正常對照組(25mmol/L葡萄糖)及50、75、100mmol/L不同濃度葡萄糖的條件培養(yǎng)基,采用CCK-8法摸索高糖對SCs的最佳作用時間和最宜作用濃度:分別加入普通培養(yǎng)基、正常鼠血清培養(yǎng)基、高糖培養(yǎng)基(Glu)、筋脈通(JMT)和神經(jīng)妥樂平(Ntp)含藥血清進行培養(yǎng),探索筋脈通含藥血清對高糖條件下SCs活性的影響;ELISA法檢測不同干預(yù)條件下SCs上清液中IL-6、TNF-α、NGF的含量;Western Blot法檢測S
4、Cs中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α及NGF、NT-3蛋白的表達。
[結(jié)果]
第一部分:
1.血糖和體重:與Con組相比,各造模組大鼠血糖均升高(P<0.05)。藥物干預(yù)后,治療組血糖在同一時間點與DM組相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),治療組間血糖在各時間點均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。造模后各組大鼠體重?zé)o統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。給藥4周后,DM組與Con組相比體重下降(P<0.05)
5、;給藥8、12、16周各造模組與Con組相比體重下降(P<0.05),各造模組組間無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
2.機械痛閾值:與Con組相比,DM組的左右足機械痛閾值均降低(P<0.05),糖尿病周圍神經(jīng)病變(DPN)模型成功建立。
3.ELISA法檢測DPN大鼠血清中IL-6、TNF-α、NGF的含量:
(1) IL-6、TNF-α:與Con組相比,各組大鼠血清中IL-6、TNF-α含量均升高(P<0
6、.05);與DM組相比,JMT組大鼠血清中IL-6、TNF-α含量均降低(P<0.05),Ntp組無統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05);與Ntp組相比,JMT組IL-6、TNF-α含量均降低(P<0.05)。
(2)NGF:與Con組相比,DM組、JMT組大鼠血清中NGF含量減少(P<0.01、P<0.05);與DM組相比,各治療組均升高,差異具有顯著性意義(P<0.01);JMT組較Ntp組血清中NGF含量減少,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(
7、P<0.01)。
4.免疫組化法檢測DPN大鼠坐骨神經(jīng)中NT-3的表達:
與Con組相比,DM組大鼠坐骨神經(jīng)NT-3的IOD值下降(P<0.05);與DM組相比,JMT組、Ntp組大鼠坐骨神經(jīng)NT-3的IOD值升高(P<0.05);JMT組與Ntp組相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
5.Western Blot檢測坐骨神經(jīng)IL-1、IL-6、IL-10、TNF-α、NGF、NT-3蛋白的表達:
8、(1) IL-1β、IL-10:與Con組相比,DM組IL-1β、IL-10蛋白表達增加(P<0.05);與DM組相比,JMT組IL-1β、IL-10蛋白表達減少(P<0.05);JMT組與Ntp組相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
(2) IL-6:各組IL-6蛋白表達均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);
(3) TNF-α:與Con組相比,DM組TNF-α蛋白表達增加(P<0.05);與DM組相比,JMT組、Ntp組
9、TNF-α蛋白表達減少(P<0.05);JMT組與Ntp組TNF-α蛋白表達無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
(4) NGF:與Con組相比,DM組NGF蛋白表達減少(P<0.05);與DM組相比,JMT組NGF蛋白表達增加(P<0.05);與Ntp組相比,JMT組NGF蛋白表達增加(P<0.05)。
(5) NT-3:與Con組相比,DM組NT-3蛋白表達減少(P<0.05);與DM組相比,JMT組NT-3蛋白表達增
10、加(P<0.05);JMT組與Ntp組無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
第二部分:
1.成功培養(yǎng)乳鼠坐骨神經(jīng)SCs,經(jīng)鑒定純度可達90%以上。
2.CCK-8比色法檢測絀胞活性:
(1)糖濃度的選擇:隨培養(yǎng)時間的延長,各濃度葡萄糖組對SCs活性的抑制作用最早于48h時產(chǎn)生,50mM Glu組、75mM Glu組、100mM Glu組均表現(xiàn)出較為明顯的抑制作用,故選擇48h、50 mMGlu作為最佳作
11、用時間和最適糖濃度。
(2)筋脈通含藥血清對高糖條件下SCs活性的影響:與正常對照組相比,正常鼠血清組、JMT組的絀胞相對活性均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),50mM Glu組細胞相對活性下降(P<0.01),Ntp組細胞相對活性亦有所下降(P<0.05);與50mMGlu組比較,JMT組細胞相對活性升高(P<0.01),Ntp組無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);與Ntp組相比,JMT組細胞相對活性升高(P<0.01)。
12、 3.ELISA法檢測SCs上清液中IL-6、TNF-α、NGF的含量:
(1) IL-6:各組SCs上清液中IL-6含量均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);
(2) TNF-α:與Con組相比,Glu組SCs.上清液中TNF-α含量增加(P<0.05);與Glu組相比,JMT組SCs上清液中TNF-α含量降低(P<0.05);與Ntp組相比,JMT組SCs上清液中TNF-α含量降低(P<0.05)。
(3)
13、NGF:與Con組相比,Glu組SCs上清液中NGF含量降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05):與Glu組相比,JMT組與Ntp組SCs上清液中NGF含量均升高(P<0.05)。
4.Western Blot檢測IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、NGF、NT-3蛋白表達:
(1) IL-1β:與Con組相比,Glu組IL-1β蛋白表達增加(P<0.05);與Glu組相比,JMT組IL-1β蛋白表達減少(
14、P<0.01);與Ntp組相比,JMT組IL-1β蛋白表達減少(P<0.05)。
(2) IL-6:各組IL-6蛋白表達無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);
(3) IL-10:與Con組相比,Glu組、Ntp組IL-10蛋白表達增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01,P<0.05);與Glu組相比,JMT組IL-10蛋白表達減少(P<0.01);與Ntp組相比,JMT組IL-10蛋白表達減少(P<0.01)。
15、(4) TNF-α:與Con組相比,Glu組TNF-α蛋白表達增加(P<0.05);與Glu組相比,JMT組TNF-α蛋白表達減少(P<0.05);JMT組與Ntp組TNF-α蛋白表達無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
(5) NGF:與Con組相比,Glu組、Ntp組NGF蛋白表達降低(P<0.01);與Glu組相比,JMT組NGF蛋白表達增加(P<0.05);與Ntp組相比,JMT組NGF蛋白表達增加(P<0.05)。
16、 (6) NT-3:與Con組相比,Glu組NT-3蛋白表達減少(P<0.05);與Glu組相比,JMT組NT-3蛋白表達增加(P<0.05);JMT組與Ntp組NT-3蛋白表達無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
[結(jié)論]
1.動物實驗
(1)一次性腹腔注射STZ(60mg/kg)建立DM大鼠模型,16周測定DM大鼠機械痛閾值降低,DPN大鼠模型成功建立;(2) DPN大鼠坐骨神經(jīng)組織中IL-1β、IL-10
17、、TNF-α蛋白表達及血清中IL-6、TNF-α含量均明顯增加,表明炎癥反應(yīng)和細胞因子參與了DPN的發(fā)生發(fā)展;(3)中藥筋脈通能夠降低DPN大鼠坐骨神經(jīng)組織中IL-1β、IL-10、TNF-α蛋白表達及血清中IL-6、TNF-α含量,具有減輕炎癥反應(yīng)的作用;同時能夠明顯增加坐骨神經(jīng)組織中NGF、NT-3表達。其中在改善血清中IL-6、TNF-α分泌和增加坐骨神經(jīng)中NGF蛋白表達方面,作用優(yōu)于Ntp組。(4)筋脈通具有改善DPN大鼠周圍神
18、經(jīng)組織損傷的作用,干預(yù)炎癥反應(yīng)及促進神經(jīng)營養(yǎng)因子分泌可能是其發(fā)揮作用的重要途徑之一。
2.細胞實驗
(1)采用組織貼塊法原代培養(yǎng)SD乳鼠坐骨神經(jīng)SCs,純化后經(jīng)S-100蛋白免疫組化鑒定,純度可達90%以上。(2)高糖(50mmol/L)培養(yǎng)雪旺細胞48h時,對其活性具有明顯抑制作用。JMT含藥血清可顯著提高高糖條件下SCs的活性,作用優(yōu)于Ntp組。(3)高糖培養(yǎng)條件下SCs上清液中TNF-α含量及SCs中IL-1β
19、、IL-10、TNF-α蛋白表達均有所增加,提示高糖刺激了SCs產(chǎn)生炎癥反應(yīng)和炎癥因子;(4)中藥筋脈通能夠降低SCs上清液中TNF-α含量及SCs中IL-1β、IL-10、TNF-α蛋白表達;同時能夠明顯增加SCs中NGF、NT-3表達。其中在改善SCs上清液中TNF-α分泌、減少SCs中IL-1β及IL-10蛋白表達和增加SCs中NGF蛋白表達方面,優(yōu)于Ntp組。
[創(chuàng)新點]
目前,炎癥因子在糖尿病周圍神經(jīng)病變中
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 中藥筋脈通對糖尿病周圍神經(jīng)病變氧化應(yīng)激及神經(jīng)修復(fù)再生的影響.pdf
- 基于氧化應(yīng)激探討中藥筋脈通對糖尿病周圍神經(jīng)損傷后修復(fù)再生的作用機制.pdf
- 糖尿病周圍神經(jīng)病變的早期診斷及中藥筋脈通對其干預(yù)的臨床研究.pdf
- 中藥筋脈通對糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠氧化應(yīng)激及細胞凋亡的影響.pdf
- 中藥筋脈通對糖尿病大鼠神經(jīng)生長因子及對雪旺細胞作用的研究.pdf
- 絡(luò)通對糖尿病大鼠周圍神經(jīng)病變影響的實驗研究.pdf
- 神經(jīng)營養(yǎng)因子對糖尿病大鼠周圍神經(jīng)病變作用的實驗研究.pdf
- 雙清對糖尿病大鼠的降糖作用及其對糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠的神經(jīng)保護作用.pdf
- ACEI對糖尿病大鼠周圍神經(jīng)病變的防治作用及機理研究.pdf
- 中藥筋脈通對糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)、雪旺細胞氧化應(yīng)激及細胞凋亡的影響.pdf
- 血糖波動對糖尿病大鼠周圍神經(jīng)病變的影響.pdf
- 梓醇在糖尿病大鼠周圍神經(jīng)病變中的作用及機制探討.pdf
- 筋脈通對糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)及雪旺細胞睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子表達的影響.pdf
- 糖尿病周圍神經(jīng)病
- 溫潤通絡(luò)方對糖尿病模型大鼠周圍神經(jīng)保護作用的實驗研究.pdf
- 鉤吻素子抗大鼠糖尿病性周圍神經(jīng)病變的作用.pdf
- 益氣活血通絡(luò)方對糖尿病周圍神經(jīng)病變患者促炎因子干預(yù)的影響的研究.pdf
- 基于Wnt信號通路探討筋脈通對糖尿病大鼠神經(jīng)髓鞘及高糖培養(yǎng)雪旺細胞的修復(fù)作用.pdf
- 消渴通痹顆粒對糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠分子免疫影響的實驗研究.pdf
- 周絡(luò)通對糖尿病周圍神經(jīng)病變的保護作用及其作用機制研究.pdf
評論
0/150
提交評論