腸道菌群改變對(duì)肝硬化大鼠細(xì)菌易位和免疫功能的影響.pdf

1、背景:腸道微生態(tài)在肝硬化感染和血液動(dòng)力學(xué)并發(fā)癥方面具有十分重要的作用。深入了解腸道微生物群與宿主的相互關(guān)系,尤其是腸道來源細(xì)菌易位至腸系膜淋巴結(jié)乃至腸外組織這個(gè)重要的事件,具有十分重要的意義。目前還沒有針對(duì)腸道微生態(tài)改變導(dǎo)致的肝硬化疾病中細(xì)菌易位的系統(tǒng)研究；另外,我們認(rèn)為在以上肝硬化細(xì)菌易位的可能的發(fā)生機(jī)制及其治療研究中,局部和全身免疫都起著非常重要的作用。首先,肝硬化患者存在不同程度的免疫功能缺失,具體表現(xiàn)為免疫細(xì)胞T、B淋巴細(xì)胞數(shù)量

2、或者比例的改變；樹突狀細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志的表達(dá)較正常人減少,并且腸道免疫功能也有不同程度的損害；也有可能是因?yàn)樗拗餮装Y細(xì)胞因子的大量產(chǎn)生。其次,關(guān)于益生菌治療肝硬化腸道微生態(tài)失衡的研究中,發(fā)現(xiàn)乳酸桿菌和雙岐桿菌等常見的益生菌制劑對(duì)機(jī)體的免疫系統(tǒng)有調(diào)節(jié)作用。目前針對(duì)肝硬化的腸道微生態(tài)改變和局部免疫以及全身免疫的系統(tǒng)研究非常少。從免疫學(xué)角度探討B(tài)T的發(fā)生機(jī)制具有重要的意義,也能為臨床運(yùn)用微生物治療預(yù)防肝硬化病人BT的發(fā)生,減少感染提供

3、理論依據(jù)。
　　 目的:觀察各種改變腸道微生物群的模型對(duì)肝硬化大鼠腸道優(yōu)勢(shì)菌群的改變和細(xì)菌易位的規(guī)律；探討各種腸道微生物群模型致細(xì)菌易位的局部和全身免疫功能的變化。初步探討肝硬化大鼠模型中腸道微生物群改變、細(xì)菌易位與機(jī)體免疫功能三者之間的關(guān)聯(lián)。
　　 方法:
　　 第一部分根據(jù)體重隨機(jī)原則先抽取健康對(duì)照組,剩余大鼠給予四氯化碳皮下注射和乙醇灌胃聯(lián)合行肝硬化造模；造模成功后,將肝硬化大鼠隨機(jī)分為6組,分別給與生理鹽

4、水、大腸桿菌、鼠傷寒沙門菌、腸球菌組、雙歧桿菌以及諾氟沙星(40mg/kg)灌胃7天后,大鼠禁食12小時(shí)后無菌操作收集標(biāo)本:肝、脾、腸系膜淋巴結(jié)、腹水、血細(xì)菌易位分析；選用標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)方法培養(yǎng)主要腸道菌群進(jìn)行數(shù)量分析；肝功能檢測(cè),鱟試劑檢測(cè)試劑盒檢測(cè)血漿內(nèi)毒素,易位細(xì)菌的細(xì)菌鑒定。
　　 第二部分大鼠分組同第一部分。收集PPs、MLN、脾臟淋巴細(xì)胞,進(jìn)行CD4+和CD8+T細(xì)胞、CD45RA+B細(xì)胞流式分析；ELISA法檢測(cè)血清細(xì)胞

5、因子IL-1β、IL-6、IL-10和INF-a；IgG和IgA。
　　 結(jié)果:
　　 第一部分與肝硬化對(duì)照組相比,灌服鼠傷寒沙門菌組ALT、AST水平增高(P<0.001),大腸桿菌組和腸球菌組AST水平增高(P<0.001)?；啬c末端菌群分析結(jié)果:鼠傷寒沙門菌組腸桿菌計(jì)數(shù)增多(p<0.05),乳酸桿菌、雙岐桿菌以及總厭氧菌計(jì)數(shù)顯著減少(P<0.001)；雙歧桿菌組腸桿菌計(jì)數(shù)顯著減少(P<0.001),乳酸桿菌和雙岐桿

6、菌計(jì)數(shù)增多(P<0.05)；諾氟沙星組腸桿菌計(jì)數(shù)減少(P<0.05),各實(shí)驗(yàn)組細(xì)菌易位發(fā)生率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。易位細(xì)菌鑒定結(jié)果:1)各組腸系膜淋巴結(jié)有單個(gè)細(xì)菌易位也有多個(gè)細(xì)菌易位；2)在同一只大鼠,易位至腸系膜淋巴結(jié)、腹水以及血的易位細(xì)菌可不一致；3)鼠傷寒沙門菌組MLN易位細(xì)菌可分離到草綠色鏈球菌和銅綠假單胞菌；4)抗生素組MLN易位細(xì)菌以革蘭陽性球菌為主；5)腸球菌易位細(xì)菌以革蘭陰性桿菌為主。
　　 第二部分與肝硬化對(duì)照組相比,

7、鼠傷寒沙門菌組血清IL-6、IL-10濃度增加(P<0.001),大腸桿菌組血清IL-1β、IL.10濃度增加(P<0.001),腸球菌組IL-1β、IL-6濃度增加(P<0.001)；鼠傷寒沙門菌組血清IgG的濃度增加,血清IgA的濃度減少(P<0.001)；MLN的CD45RA+B細(xì)胞的百分比減少(P<0.05),大腸桿菌組、雙歧桿菌組和諾氟沙星組的腸道PPs結(jié)的CD45RA+B細(xì)胞的百分比均減少(P<0.001)。雙歧桿菌組和諾氟

8、沙星組的脾臟和PPs的CD4+T和CD8+T細(xì)胞百分比增加(P<0.05)。鼠傷寒沙門菌組PPs的CD4+T和CD8+T細(xì)胞百分比顯著減少(P<0.001)。
　　 結(jié)論:
　　 不同的腸道菌群改變能夠預(yù)防或加劇肝硬化大鼠肝損傷和細(xì)菌易位；腸道菌群的改變、腸道屏障損傷、內(nèi)毒素血癥三者相互作用可影響到細(xì)菌易位和肝功能。
　　 腸道菌群改變能夠影響肝硬化大鼠的腸道局部和全身免疫。改變的腸道菌群能夠影響炎癥細(xì)胞因子的釋