孟魯司特對嗜酸細(xì)胞性胃腸炎小鼠模型治療作用及機制的研究.pdf

1、研究目的：
　　嗜酸細(xì)胞性胃腸炎(Eosinophilic gastroenteritis，EG)是以胃腸道的某些部位彌漫性或局限性嗜酸性粒細(xì)胞(eosinophil EOS)異常浸潤為特征的胃腸道疾病。近年來國內(nèi)外有用白三烯受體拮抗劑孟魯司特成功治療EG的臨床病例報道。本實驗通過建立卵清蛋白(Ovalbumin OVA)誘導(dǎo)的EG小鼠模型，觀察孟魯司特治療EG小鼠的療效及其作用機制，為孟魯司特治療EG提供科學(xué)的理論依據(jù)。

2、　　研究方法：
　　50只雌性Balb/c小鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按隨機原則分為正常對照組(n=10)和OVA處理組(n=40)。第1天OVA處理組小鼠腹腔注射OVA和AL(OH)3溶液(50ug/1mg)一次以基礎(chǔ)致敏，第15天OVA處理組小鼠腹腔注射用生理鹽水配制的OVA溶液(50ug)一次達(dá)強化致敏，第20-24天給予OVA(50mg)隔日灌胃激發(fā)胃腸道過敏。正常對照組各時間點給予等劑量磷酸鹽緩沖鹽水(Phosphate b

3、uffer saline PBS)處理，制備EG小鼠模型。造模后觀察小鼠一般表現(xiàn)，檢測外周血EOS、IgE含量，隨機處死小鼠10只（正常對照組2只和OVA處理組8只），觀察小鼠胃腸病理，以驗證造模成功。造模成功后，將OVA處理組再隨機分為模型組、強的松+孟魯司特組，孟魯司特組和強的松組8只/組。第26天起模型組及各藥物治療組繼續(xù)給予OVA隔日灌胃激發(fā)胃腸反應(yīng)，同時藥物治療組分別給予強的松(3mg/Kg)、孟魯司特(1.5mg/Kg)灌胃

4、，正常對照組、模型組給予相應(yīng)體積的生理鹽水連續(xù)灌胃。第40天取材，常規(guī)計數(shù)法檢測小鼠外周血EOS含量，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA)法檢測小鼠血清IgE、白三烯D4(LTD4)及小鼠空腸組織勻漿白介素-5（IL-5）、嗜酸細(xì)胞趨化因子-1（Eotaxin-1）含量。HE染色觀察小鼠胃腸粘膜組織病理學(xué)變化。免疫組化方法檢測小鼠空腸組織主要堿性蛋白(major basic

5、 protein，MBP)表達(dá)。熒光定量PCR技術(shù)測定小鼠空腸組織半胱氨酰白三烯受體-1(cysteinyl leukotrienereceptors-1，CysLTR1)基因表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.臨床癥狀
　　正常對照組小鼠毛發(fā)光澤，精神良好，活動正常。OVA處理組小鼠在激發(fā)胃腸道過敏后，出現(xiàn)活動減少、精神不佳、豎毛、腹瀉癥狀。給予藥物治療2周，小鼠上述癥狀與模型組比較均有所好轉(zhuǎn)，各給藥組間比較無明顯差異。

6、r>　　2.體重變化
　　造模后，OVA處理組小鼠體重明顯低于正常對照組(20.65±0.78g vs21.25±0.88g，P＜0.05)。給藥治療2周后，孟魯司特+強的松組、孟魯司特組、強的松組小鼠體重下降有所改善，與模型組比較有顯著差異(20.91±0.83g#、21.30±1.16g##、21.31±1.00g##vs19.69±0.91g,#P＜0.05，##P＜0.01)。各藥物治療組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）

7、。
　　3.外周血EOS計數(shù)造模完成后，檢測小鼠外周血中EOS計數(shù)，結(jié)果顯示OVA處理組小鼠EOS較正常對照組明顯升高[12.00±2.82(×109/L) vs6.45±1.92(×109/L)，P＜0.01]。連續(xù)給藥治療2周后，孟魯司特+強的松組、孟魯司特組、強的松組小鼠外周血EOS含量明顯降低，與模型組比較有顯著差異[14.38±4.14(×109/L)##、16.38±2.67(×109/L)#、13.88±3.80(×

8、109/L)##vs21.13±4.88(×109/L)，#P＜0.05，##P＜0.01]。各藥物治療組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　4.胃、腸組織病理正常對照組胃、腸粘膜結(jié)構(gòu)正常，厚薄均勻、規(guī)則、完整，未見水腫、充血及炎癥細(xì)胞浸潤，粘膜上皮腺細(xì)胞均正常，上皮細(xì)胞未見壞死、脫落。OVA處理組胃粘膜變薄、斷裂，下層充血，粘膜上皮細(xì)胞近胃腔端腺上皮脫落，有炎癥細(xì)胞浸潤。腸組織上皮細(xì)胞水腫、并見局灶性壞死、脫落，有大量炎性

9、細(xì)胞浸潤。給藥治療2周后，各給藥組小鼠胃、腸粘膜各層結(jié)構(gòu)基本正常，僅見輕微充血及炎癥細(xì)胞浸潤，上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本正常。
　　5.空腸組織MBP的表達(dá)正常對照組小鼠空腸MBP的表達(dá)弱(+)，模型組小鼠空腸MBP表達(dá)明顯增強(+++)，各給藥組空腸MBP表達(dá)均較模型組減弱(+)。
　　6.血清IgE含量造模后，OVA處理組小鼠血清IgE含量較正常對照組明顯升高(249.90±28.66ng/ml vs174.24±17.09ng/

10、ml，P＜0.01)。藥物治療2周后，孟魯司特+強的松組、孟魯司特組、強的松組小鼠外周血LgE含量明顯降低，與模型組比較有顯著差異(220.78±21.02 ng/ml#、214.36±19.66 ng/ml##、202.68±16.97ng/ml##vs243.17±17.48ng/ml，#P＜0.05，##P＜0.01)。各藥物治療組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　7.血清LTD4含量藥物治療2周后，模型組小鼠血清L

11、TD4含量較正常對照組明顯升高（174.73±19.55ng/ml vs109.38±14.90ng/ml，P＜0.01）。孟魯司特+強的松組和孟魯司特組小鼠血清LTD4含量明顯降低，與模型組比較有顯著差異(126.39±35.93 ng/ml、131.23±29.68ng/ml vs174.73±19.55ng/ml，P＜0.01)。而強的松組小鼠血清LTD4含量與模型組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(159.31±45.13ng/ml vs174

12、.73±19.55ng/ml，P＞0.05)。
　　8.空腸組織CysLTR1 mRNA表達(dá)藥物治療2周后，模型組小鼠空腸組織CysLTR1 mRNA表達(dá)較正常對照組明顯增高（2.21±0.22 vs1.16±0.36，P＜0.01）。孟魯司特+強的松組和孟魯司特組CysLTR1 mRNA表達(dá)明顯降低，與模型組比較有顯著差異（1.71±0.54#、1.63±0.33##vs2.21±0.22，#P＜0.05，##P＜0.01）。強

13、的松組該基因表達(dá)略降低，與模型組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(2.01±0.26 vs2.21±0.22，P＞0.05)。各給藥治療組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　9.空腸組織勻漿IL-5含量藥物治療2周后，模型組小鼠空腸組織勻漿IL-5含量較正常對照組明顯升高(162.59±17.93ng/g vs103.90±12.48ng/g，P＜0.01)。孟魯司特+強的松組、孟魯司特組、強的松組小鼠空腸組織勻漿IL5含量明顯降低，與

14、模型組比較有顯著差(127.29±30.96ng/g##，136.20±25.50ng/g#，113.57±34.26ng/g##vs162.59±17.93ng/g，#P＜0.05，##P＜0.01）。各藥物治療組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　10.空腸組織勻漿Eotaxin-1含量藥物治療2周后，模型組小鼠空腸組織勻漿Eotaxin-1含量較正常對照組明顯升高(468.92±59.97ng/g vs291.77±5

15、0.77ng/g，P＜0.01)。孟魯司特+強的松組和孟魯司特組小鼠空腸組織勻漿Eotaxin-1含量明顯降低，較模型組有顯著差異(364.19±75.81ng/g，394.99±30.00ng/g vs468.92±59.97ng/g,P＜0.01)。強的松組Eotaxin-1含量略有減低，與模型組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(424.77±53.77ng/g vs468.92±59.97ng/g，P＞0.05）。但各給藥治療組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)

16、意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.應(yīng)用盂魯司特治療EG小鼠模型，可使小鼠臨床癥狀緩解，外周血EOS計數(shù)下降，胃腸組織病理損傷修復(fù)，達(dá)到治療效果，且與強的松療效相似。
　　2.EG小鼠模型空腸組織CysLTR1 mRNA表達(dá)上調(diào)，血清LTD4水平增高，說明白三烯在GE的發(fā)病中起一定作用。
　　3.孟魯司特可通過與CysLTs競爭性結(jié)合腸組織中受體發(fā)揮其拮抗作用，還可抑制EOS、IgE及LTD4參與的炎癥反