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文檔簡介
1、目的：檢測腦膠質瘤細胞中NEDD4-1對鳥苷酸交換因子CNrasGEF的泛素化作用，探討NEDD4-1調節(jié)膠質瘤細胞侵襲及遷移的機制。
方法：(1)采用脂質體瞬時轉染法將NEDD4-1質粒轉入膠質瘤U251細胞中，應用蛋白免疫共沉淀(CoIP)結合免疫印跡(IB)法，觀察外源的NEDD4-1和內源性CNrasGEF的相互作用；(2)共表達NEDD4-1和ubiquitin，用蛋白免疫共沉淀(CoIP)結合免疫印跡(IB)法
2、，檢測NEDD4-1對內源的CNrasGEF的泛素化作用；(3)共表達NEDD4-1和ubiquitin的同時，用蛋白酶體抑制劑MG132處理，觀察CNrasGEF水平的改變。
結果：(1)轉染NEDD4-1質粒后，外源性表達的NEDD4-1可與內源性CNrasGEF共沉淀；(2)共表達NEDD4-1和ubiquitin后，NEDD4-1對內源的CNrasGEF有泛素化作用，CNrasGEF能與泛素共沉淀；(3)共表達NE
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