紫花苜蓿鹽誘導HD-Zip類轉(zhuǎn)錄因子MsHB2的克隆及功能分析.pdf

1、本研究從先前獲得的一條紫花苜蓿鹽誘導基因的EST序列基礎(chǔ)上使用RACE法克隆得到一個HD-Zip類基因（MsHB2）全長。為獲得MsHB2在鹽脅迫應(yīng)激調(diào)控過程中的功能和作用機理等信息，本研究從基因編碼蛋白序列結(jié)構(gòu)、亞細胞定位、表達模式、超表達轉(zhuǎn)基因等方面進行了相關(guān)研究。
　　以先前獲得的一個鹽誘導基因的EST序列為基礎(chǔ)設(shè)計引物，從紫花苜蓿中克隆得到其3'和5'末端序列，經(jīng)DNAMAN軟件拼接得到1126 bp的全長序列。使用多種生

2、物信息學軟件分析表明，其編碼蛋白包含247個氨基酸，具有一個同源異型結(jié)構(gòu)域和一個亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域，與擬南芥HD-Zip第Ⅰ類轉(zhuǎn)錄因子ATHB12具有較高相似性，進化樹聚類分析結(jié)果表明其編碼蛋白屬于第Ⅰ類同源異型域亮氨酸拉鏈蛋白，將其命名為MsHB2。
　　構(gòu)建了MsHB2的亞細胞定位瞬時表達載體，使用基因槍轉(zhuǎn)化法將MsHB2與GFP在洋蔥表皮細胞中融合瞬時表達并觀察其亞細胞定位熒光信號。洋蔥亞細胞定位分析結(jié)果表明MsHB2定位于細

3、胞核。將生長30d的中苜一號分別進行300 mmol·L-1 NaCl和0.1 mmol·L-1 ABA脅迫處理，取脅迫處理0、2、4、10、24 h后的根和莖葉組織提取總RNA并進行熒光定量PCR分析。轉(zhuǎn)錄水平表達分析結(jié)果表明MsHB2受300mmol·L-1 NaCl和0.1 mmol·L-1 ABA脅迫誘導而表達量顯著升高。構(gòu)建了MsHB2的植物超表達載體，轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌GV3101菌株，使用農(nóng)桿菌花序侵染法轉(zhuǎn)化擬南芥并在鹽脅迫條件下