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文檔簡介
1、目的：
1、制備CysLT1基因敲除小鼠模型及H99-GFP菌株；
2、研究小鼠感染隱球菌H99后CysLT1受體在腦微血管及海馬中的表達。
方法：
1、采用PCR，RT-PCR及Western-blot檢測鑒定CysLT1基因敲除小鼠；
2、基因槍轟擊技術(shù)制備H99-GFP隱球菌菌株；
3、采用小鼠氣管接種新生隱球菌H99建立實驗性小鼠腦膜炎模型；
4、免疫組化及免
2、疫熒光方法檢測CysLT1受體在腦組織中的表達。
結(jié)果：
1、本實驗室構(gòu)建的CysLT1基因敲除小鼠經(jīng)在核酸及蛋白水平上檢測鑒定，均不表達CysLT1受體；
2、帶有GFP的質(zhì)粒通過基因槍轟擊可整合入H99基因組內(nèi)，篩選出的H99菌株可高水平穩(wěn)定表達GFP；
3、接種隱球菌后的野生型小鼠與假手術(shù)組小鼠相比，C ysLT1受體在大腦皮層和海馬神經(jīng)元細胞中的表達明顯增加，尤其在腦微血管中的表達顯著升高
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