系統(tǒng)性硬皮病患者CD4+T細(xì)胞組蛋白修飾異常的研究.pdf

1、目的:系統(tǒng)性硬皮病(SSc)是一種少見但又嚴(yán)重威脅人類生命的自身免疫性疾病，目前其發(fā)病機(jī)制并不十分明確。越來越多的研究表明表觀遺傳學(xué)在SSc發(fā)病過程中起著重要作用，我們課題組前期研究發(fā)現(xiàn)表觀遺傳學(xué)主要機(jī)制之一——DNA甲基化在SSc患者CD4+T細(xì)胞中存在異常，總DNA甲基化下降提示T細(xì)胞活化，DNA低甲基化引起調(diào)節(jié)基因(CD70、CD40L)表達(dá)增高，促進(jìn)T-B細(xì)胞共活化，從而參與SSc的發(fā)生;那么對于表觀遺傳學(xué)另一重要機(jī)制—組蛋白修

2、飾是否在SSc患者中存在異常，從而參與了該病的發(fā)生？本課題將做重點(diǎn)研究。
　　方法:密度梯度離心法分離20例SSc患者和10例正常對照外周血淋巴細(xì)胞，利用磁珠分選法分離出各組CD4+T細(xì)胞。采用EpiQickTM組蛋白H3/H4乙?；虷3K4/H3K9甲基化試劑盒分別測定實(shí)驗(yàn)組和對照組組蛋白乙酰化/甲基化水平;Real-time PCR檢測乙?；窰ATs(p300、PCAF)和去乙?；窰DACs(HDAC1、2、3、4、6、

3、7) mRNA水平。然后對組蛋白總H3乙?；胶透牧糝odnan皮膚厚度積分法(mRTSS)值以及乙酰化、去乙酰化酶表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)分析。
　　結(jié)果: SSc患者CD4+T細(xì)胞組蛋白總H3乙?；斤@著低于對照組(P=0.015)，且與mRTSS值呈負(fù)相關(guān)(r=-0.770，P＜0.010);組蛋白總H4乙?；捷^對照組增高，但統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無明顯差異(P=0.200)。SSc患者CD4+T細(xì)胞中2種組蛋白乙酰化酶(p300、PC

4、AF)表達(dá)水平較對照組顯著升高(P=0.007，P=0.004);5種組蛋白去乙酰化酶較對照組表達(dá)出現(xiàn)異常，其中HDAC1、HDAC4表達(dá)水平較對照組顯著升高(P=0.000，P=0.000)，而HDAC2、HDAC6、HDAC7表達(dá)水平較對照組顯著下降(P=0.000，0.000，0.005)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)HDAC1表達(dá)水平與組蛋白總H3乙?；匠拭黠@負(fù)相關(guān)(r=-0.860，p＜0.010)，提示其在組蛋白總H3低乙?；^程中發(fā)