介孔氧化硅納米材料介導(dǎo)siRNA進行基因治療的初步研究.pdf

1、在眾多的基因治療載體研究中,介孔氧化硅納米材料(MSNs)作為基因載體的研究越來越受到人們的廣泛重視,近年來,已經(jīng)成為了納米材料研究中的前沿和熱點之一。這主要是由于它自身具有的一系列如規(guī)則的形狀和孔道結(jié)構(gòu)、較高的比表面積、易制備、較大的孔積、孔徑、在一定范圍內(nèi)易調(diào)控且容易靶向修飾等優(yōu)勢。
　　本文首先介紹了掃描電鏡和透射電鏡下未經(jīng)修飾(D-MSNs)、20％氨基化修飾(N-MSNs)、4%轉(zhuǎn)鐵蛋白靶向修飾(Tf-MSNs)的MSN

2、s的形貌特征。接下來通過X-射線衍射、Zeta電位、傅里葉變換紅外光譜來表征材料的成分、結(jié)構(gòu)及重要的物化性能,并利用瓊脂糖凝膠電泳與微量紫外分光光度計相結(jié)合的方式來研究材料對治療基因的吸附、釋放以及保護功能。最后利用激光共聚焦顯微鏡和流式細胞儀來檢測材料攜帶功能化的siRNA進行Hela細胞的體外攝入效果以及對Survivin基因進行沉默致使Hela細胞凋亡的情況。
　　結(jié)果表明MSNs為規(guī)則均一的球形粒子,粒徑為(200±10)

3、nm;具有一定的孔道結(jié)構(gòu)且孔道六方有序;紅外檢測表明成功進行了氨基化修飾和轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾。未經(jīng)DNA吸附之前材料分散,吸附特定量DNA之后,N-MSNs有聚集的趨勢,Tf-MSNs有少量的聚集現(xiàn)象發(fā)生。在2mg的MSNs體系中,D-MSNs、N-MSNs、Tf-MSNs對20bp的DNA片段(160μg/mL×100μL)的吸附率為12.1%、93.7%、90%;N-MSNs、Tf-MSNs的釋放率為72.8%、60.5%;吸附DNA后,

4、核酸酶處理與未處理的材料同時進行釋放,釋放率相差非常小。采用Hela細胞進行細胞攝入,D-MSNs、N-MSNs、Tf-MSNs的攝入效率分別為34.25%、95.86%、99.33%;細胞凋亡率檢測為4.14%、8.45%、16.98%。
　　此次研究,成功的對MSNs進行了針對于體外轉(zhuǎn)染的氨基化修飾和針對于靶向轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾。細胞外研究修飾后的材料對治療基因具有很好的吸附釋放與保護效果。Hela細胞攝入效率非常高,并且Tf