健腦1方治療血管性癡呆療效觀察及對(duì)NMDAr-CaMKⅡ通路的影響.pdf

1、目的:
　　血管性癡呆(Vascular Dementia，VD)是指缺血性、出血性腦血管疾病引起的腦損害導(dǎo)致的癡呆，它在各種老年期癡呆的病因中僅次于阿爾茨海默病(Alzheimer'sdisease，AD)和路易體癡呆(Dementia with Lewy body，DLB)，約占老年期癡呆的20％左右。VD的患病率隨年齡增長(zhǎng)呈指數(shù)上升，嚴(yán)重影響到患者的生存質(zhì)量，并給其家庭甚至社會(huì)帶來(lái)了沉重負(fù)擔(dān)。鑒于VD的可防治性，應(yīng)及早干預(yù)治

2、療，預(yù)后良好。由于其病因及發(fā)病機(jī)制目前尚不清楚，且西藥不良反應(yīng)較多，運(yùn)用中醫(yī)藥治療VD越來(lái)越受到人們的關(guān)注，近年來(lái)，國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)中醫(yī)藥治療本病進(jìn)行了深入研究，發(fā)現(xiàn)中醫(yī)藥治療VD的優(yōu)勢(shì)與特色在于可顯著改善臨床癥狀、減少不良反應(yīng)。
　　國(guó)醫(yī)大師鄧鐵濤教授根據(jù)自己多年的臨床經(jīng)驗(yàn)，提出以“益氣除痰活血法”治療血管性癡呆的學(xué)術(shù)思想，鄧?yán)险J(rèn)為本病主要病機(jī)是氣虛為本，痰瘀為標(biāo)，由痰致瘀，以痰為主。治療上牢抓中醫(yī)辨證論治的“整體觀”，認(rèn)為本病雖病位

3、在腦，但發(fā)病之根本在于脾，故強(qiáng)調(diào)本病治療關(guān)鍵在于益氣健脾，并主張治療痰瘀同病時(shí)重在化痰，輔以祛瘀，自擬健腦1方在臨床實(shí)踐中療效顯著，值得深入研究及臨床推廣。
　　為了更好地總結(jié)鄧鐵濤教授臨床經(jīng)驗(yàn)，探究其臨證規(guī)律及學(xué)術(shù)特色，挖掘其科學(xué)內(nèi)涵，冀以弘揚(yáng)鄧?yán)蠈W(xué)術(shù)思想，傳承仁術(shù)。本課題是在中醫(yī)理論的指導(dǎo)下，結(jié)合鄧鐵濤教授多年的臨床經(jīng)驗(yàn)，客觀評(píng)價(jià)健腦1方治療VD的臨床療效及其安全性，為本方良好的臨床療效提供客觀數(shù)據(jù)支持，從而更好地繼承名老中醫(yī)

4、學(xué)術(shù)經(jīng)驗(yàn)，豐富中醫(yī)學(xué)理論，繼承和發(fā)揚(yáng)中醫(yī)藥事業(yè)。并通過(guò)對(duì)大量國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)研究，提出“健腦1方通過(guò)干預(yù)NMDAR-CaMKⅡ信號(hào)傳導(dǎo)通路調(diào)控一系列下游蛋白是其抗VD的可能作用機(jī)制”的假設(shè)。通過(guò)對(duì)VD大鼠海馬NR2B和CaMKⅡ的基因表達(dá)深入研究有望闡明健腦1方影響VD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力主要的分子生物學(xué)作用機(jī)制，并為中醫(yī)藥治療VD的研究提供新的靶點(diǎn)和思路。
　　方法:
　　臨床研究:本課題采用平行、隨機(jī)、對(duì)照實(shí)驗(yàn)方案，選擇2014

5、年1月至2014年12月就診于廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院心內(nèi)科及廣東省第二中醫(yī)院腦病科門診及住院符合血管性癡呆（氣虛痰瘀證）診斷標(biāo)準(zhǔn)患者60例，采用隨機(jī)數(shù)字表法按照1∶1的比例將60例患者隨機(jī)均分成治療組、對(duì)照組各30例，同時(shí)給予兩組患者降壓、降脂等一般治療措施，其中治療組給予健腦1方治療，對(duì)照組予尼莫地平片治療，治療期間停用其它與治療本病有關(guān)的內(nèi)服藥物，療程共6周。治療前與治療6周后記錄每例入組患者的MMSE評(píng)分、ADL評(píng)分、NPI評(píng)

6、分、中醫(yī)證候積分的變化，并記錄治療前后血常規(guī)、肝腎功能等安全性指標(biāo)與治療相關(guān)的不良反應(yīng)事件，以客觀準(zhǔn)確評(píng)價(jià)健腦1方治療血管性癡呆的臨床療效及安全性。
　　實(shí)驗(yàn)研究:本研究采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久性結(jié)扎建立VD動(dòng)物模型，將60只SD雄性大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、高劑量組、低劑量組及尼莫地平組，低、高劑量組、尼莫地平組大鼠分別灌服低劑量健腦1方、高劑量健腦1方和尼莫地平混懸液;模型組、假手術(shù)組均給予生理鹽水灌胃，給藥30天，用Morr

7、is水迷宮檢測(cè)各組大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，HE染色觀察大鼠海馬組織學(xué)改變，用RT-PCR法檢測(cè)大鼠海馬NR2BmRNA及CaMKⅡmRNA表達(dá)水平，從而探討鄧鐵濤教授健腦1方對(duì)血管性癡呆大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力的影響，并從分子生物學(xué)角度探討其可能的作用機(jī)制。
　　成果:
　　臨床研究:試驗(yàn)結(jié)果顯示:兩組患者在性別、年齡、病程、病情及文化程度方面等因素構(gòu)成比的差異性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），提示各組患者在性別、年齡、病程、病情及文化

8、程度的構(gòu)成方面基本均衡，具有可比性。兩組患者治療前MMSE、ADL、NPI及中醫(yī)證候積分均未見有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），具有可比性;最終研究結(jié)果可見:經(jīng)過(guò)6周治療，兩組患者治療后MMSE評(píng)分均較治療前提高，具有顯著性差異(P＜0.01);治療后兩組患者M(jìn)MSE評(píng)分比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，兩組治療前后差值比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);治療組總有效率80.0％，對(duì)照組總有效率53.3％，提示兩組均能改善患者認(rèn)知能力，且

9、治療組優(yōu)于對(duì)照組（P＜0.05）。兩組患者治療后ADL評(píng)分均較治療前降低，具有顯著性差異（P＜0.01）;治療后兩組患者ADL評(píng)分及兩組治療前后差值比較均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）;治療組總有效率23.3％，對(duì)照組總有效率30.0％，提示兩組均能提高患者日常生活活動(dòng)能力，且臨床療效相近（P＞0.05）。兩組患者治療后NPI評(píng)分與治療前比較均無(wú)顯著性差異(P＞0.05);治療后兩組患者NPI評(píng)分及兩組治療前后差值比較均無(wú)顯著性差異(P＞

10、0.05);治療組總有效率6.67％，對(duì)照組總有效率6.67％，提示兩組均未能顯著改善患者精神行為癥狀(P＞0.05)，且兩組均不能有效減少VD患者照料者的苦惱程度（P＞0.05）。治療組患者治療后中醫(yī)證候積分較治療前降低，具有顯著性差異（P＜0.01)，對(duì)照組患者治療后中醫(yī)證候積分與治療前比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，治療后兩組患者中醫(yī)證候積分及兩組治療前后差值比較均有顯著性差異(P＜0.01);治療組總有效率為56.67％，對(duì)照

11、組總有效率為10.0％，提示治療組可顯著改善患者中醫(yī)證候，對(duì)照組患者中醫(yī)證候改善甚微(P＜0.01)。參加本次研究的所有患者均未出現(xiàn)血常規(guī)及肝腎功能檢查異常，兩組患者出現(xiàn)的不良反應(yīng)癥狀輕微，安全性好。
　　實(shí)驗(yàn)研究:Morris水迷宮測(cè)試結(jié)果:隨著訓(xùn)練天數(shù)的增加，各組大鼠逃避潛伏期逐漸縮短，說(shuō)明各組大鼠在學(xué)習(xí)訓(xùn)練中逐漸學(xué)會(huì)尋找平臺(tái)，但學(xué)習(xí)記憶能力存在顯著差異，其中訓(xùn)練四天內(nèi)每一天模型組大鼠逃避潛伏期均較假手術(shù)組明顯延長(zhǎng)(P＜0.0

12、5或P＜0.01)，說(shuō)明模型組大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力出現(xiàn)障礙，第三天，高劑量組大鼠逃避潛伏期較模型組明顯下降（P＜0.05);第四天，高劑量組及尼莫地平組大鼠逃避潛伏期均較模型組顯著下降（P＜0.01和P＜0.05）?？臻g探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:120s內(nèi)，高劑量組及假手術(shù)組大鼠穿越平臺(tái)的次數(shù)明顯高于模型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);各組大鼠停留在平臺(tái)所在象限的游泳時(shí)間與模型組大鼠比較差異尚未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，由此可見，

13、實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明高劑量組VD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力顯著提高。
　　VD大鼠海馬組織學(xué)改變:光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)模型組大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞丟失;神經(jīng)細(xì)胞核碎裂、核膜不清、核仁消失，神經(jīng)細(xì)胞收縮，胞漿嗜酸性增強(qiáng)，膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)性增生;病變集中在CA1、CA2及CA3區(qū);尼莫地平組大鼠海馬病變集中在CA1區(qū)，有神經(jīng)元細(xì)胞損傷;高、低劑量組大鼠海馬病變集中在CA1、CA3區(qū)，可見神經(jīng)元細(xì)胞損傷，病變程度較模型組減輕，提示健腦1方及尼莫地平可減少VD大鼠海馬組織

14、神經(jīng)元損傷范圍及程度。
　　大鼠海馬NR2B mRNA及CaMKⅡ mRNA表達(dá):實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明模型組大鼠海馬NR2B mRNA的表達(dá)水平與假手術(shù)組相比明顯降低（P＜0.01）。而與模型組相比較，尼莫地平組及高劑量組大鼠海馬NR2B mRNA的表達(dá)水平顯著增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，低劑量組有增高NR2B mRNA表達(dá)的趨勢(shì)。模型組大鼠海馬CaMKⅡ mRNA的表達(dá)與假手術(shù)組相比稍降低（P＞0.05），高劑量及尼莫地平

15、組都能略微提高mRNA的表達(dá)水平，但差異無(wú)均統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)
　　結(jié)論:
　　臨床研究結(jié)果提示健腦1方治療VD在改善患者認(rèn)知功能、提高患者日常生活活動(dòng)能力方面具有良好療效，還能明顯改善患者的中醫(yī)臨床癥狀，但對(duì)VD患者精神行為癥狀未見明顯改善，且不良反應(yīng)少，安全性好。本課題研究印證了基于鄧?yán)咸岢龅摹耙鏆獬祷钛ā敝委熝苄园V呆理念的正確性和科學(xué)性，以及基于鄧?yán)吓R床經(jīng)驗(yàn)而創(chuàng)制的健腦1方的有效性和安全性。
　　實(shí)