臭氧對口腔綜合治療臺水道系統(tǒng)中HBV滅活效果的實驗研究.pdf

1、目的：探討能夠限時滅活口腔綜合治療臺水道中乙肝病毒的最低臭氧溶液濃度。擬用多種方法控制溶液的臭氧濃度的穩(wěn)定，將配制的不同濃度臭氧溶液同人肝癌細胞系(HepG2)的2.2.15細胞共同培養(yǎng)后提取其上清液，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴增，熒光定量(FQ-PCR)檢測HVB-DNA的濃度，對各濃度臭氧溶液的滅活效果進行比較。并觀察并不同濃度臭氧溶液對正?？谇簧掀ぜ毎挠绊?。為臭氧在DUWLs的感染控制的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：1

2、、臭氧溶液的配置與濃度衰減實驗；
　　2、HepG2.2.15細胞的培養(yǎng)：常規(guī)培養(yǎng)HepG2.2.15細胞；
　　3、不同濃度的臭氧溶液對HepG2.2.15細胞株表達物的作用；
　　4、臭氧溶液對正常口腔組織的細胞形態(tài)學(xué)及細胞毒性實驗；
　　5、統(tǒng)計學(xué)分析：采用單因素方差分析統(tǒng)計學(xué)方法，兩組組間比較采用SNK-q檢驗。
　　結(jié)果：1、不同封閉條件和放置時間的臭氧濃度變化：臭氧溶液放置30min后，各組濃度

3、變化差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=9.77，P<0.01)。在密封條件下，水溫為5℃和水溫為10℃時臭氧濃度比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(q=1.36，P>0.05)；密封條件下，水溫為5℃與水溫20℃時臭氧濃度比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(q=4.88，P<0.01)。水溫為5℃時，密封和非密封臭氧濃度差異無統(tǒng)計學(xué)意義(q=0.59，P>0.05)；水溫為20℃時，密封和非密封臭氧濃度差異有統(tǒng)計學(xué)意義(q=3.37，P<0.01)。
　　2、臭氧溶液對

4、HepG2.2.15細胞上清液中HBV-DNA含量PCR熒光結(jié)果示：臭氧溶液能夠明顯減少HepG2.2.15上清液中HBV-DNA含量。相同時間內(nèi)不同濃度臭氧溶液對HBV-DNA含量的影響不同，臭氧溶液濃度越大，其對HepG2.2.15細胞HBV-DNA的表達抑制越明顯。
　　3、細胞培養(yǎng)上清液中HVB-DNA檢測結(jié)果：臭氧溶液組比超純水對照組HBV-DNA量明顯降低。在臭氧作用1min時，臭氧濃度為1.5mg/L組和其他各組相比

5、，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.01)；臭氧分別作用5、10、15、30min時，各組臭氧溶液均能降低HVB-DNA含量，超純水組和其他各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.01)；臭氧作用15min后，臭氧溶液各組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。
　　4、臭氧溶液對Hela細胞作用的細胞的形態(tài)學(xué)觀察：經(jīng)倒置顯微鏡檢測Hela細胞貼壁生長呈星形，棱形，細胞形態(tài)良好，胞體透亮，呈典型貼壁不規(guī)則形態(tài)，加入低濃度(0.5mg/L、0.

6、6mg/L)臭氧溶液后，對細胞形態(tài)無明顯影響，加入中濃度(1.5mg/L)臭氧溶液后細胞出現(xiàn)顆粒，有少部分胞體變小，提示細胞狀態(tài)受到一定程度影響。加入甲醛甲酚溶液后細胞形態(tài)明顯破壞，出現(xiàn)大量細胞碎片，提示細胞大量死亡，破壞嚴重。
　　5、臭氧溶液對細胞增殖的影響：MTT結(jié)果顯示，陰性對照組同低濃度臭氧溶液組(0.5mg/L、0.6mg/L)細胞相對增殖率均在100～103％之間，毒性評級為0級，其他1組中濃度臭氧溶液(1.5mg/

7、L)細胞相對增值率在75％～99％之間，毒性評級為1級。陽性對照組的細胞相對增值率在1～24％之間，毒性評級為4級，3組臭氧溶液的安全性為合格。
　　結(jié)論：1、水溫、容器是否密閉都會影響臭氧濃度，水溫越高臭氧濃度變化越快，容器密閉時，臭氧濃度穩(wěn)定。
　　2、臭氧溶液能夠有效的滅活HBV-DNA，并且臭氧濃度越高，其對HBV-DNA的滅活作用越強。臭氧濃度為0.6mg/L10min及0.5mg/L15min能將設(shè)定濃度的HVB