p63在尖銳濕疣組織中的表達(dá)意義及其與HPV的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:尖銳濕疣(condylomata acuminata，CA)是臨床上常見的性傳播疾病(Sexually transmitted disease，STD)，由人類乳頭瘤病毒(humanpapilloma virus，HPV)感染所致。由于疣體生長(zhǎng)速度快，易復(fù)發(fā)，給患者帶來了巨大的身心痛苦。HPV是一類很小的嗜上皮性DNA病毒，其中與尖銳濕疣發(fā)病相關(guān)的主要有HPV6、11、16、18型，其發(fā)病與各型病毒編碼的蛋白有關(guān)。p63與p53同

2、屬一個(gè)基因家族，兼具抑癌基因和原癌基因的作用，對(duì)于不同的刺激和調(diào)控表達(dá)不同功能。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)尖銳濕疣實(shí)驗(yàn)組和正常對(duì)照組中細(xì)胞調(diào)控因子p63蛋白表達(dá)情況的分析，探討其在尖銳濕疣疾病發(fā)生、發(fā)展過程中的作用;通過熒光定量PCR對(duì)尖銳濕疣實(shí)驗(yàn)組中HPV荷載量的測(cè)定，分析的其與p63蛋白的關(guān)系，以及二者的臨床意義。
　　方法:采用HE染色觀察組織形態(tài)特征。通過免疫組織化學(xué)PV二步法檢測(cè)正常包皮對(duì)照組和尖銳濕疣實(shí)驗(yàn)組中p63蛋白的表達(dá)，對(duì)照組

3、:20例，均為男性，年齡18～50歲，平均年齡29.15±10.19歲。實(shí)驗(yàn)組:34例，男性17例，女性17例，年齡18～52歲，平均年齡31.97±9.51歲。陽性表達(dá)判斷:細(xì)胞核中出現(xiàn)明顯棕黃色顆粒即為陽性細(xì)胞，在兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)生指導(dǎo)下，遵循客觀，雙盲原則，對(duì)樣本進(jìn)行免疫組化結(jié)果判定:觀察5個(gè)(×400)高倍視野，計(jì)算每個(gè)視野中陽性細(xì)胞的平均百分比，陽性細(xì)胞0～5％為“-”，6％～25％為“+”，26％～50％為“++”，＞5

4、0％為“+++”。通過熒光定量PCR法檢測(cè)尖銳濕疣實(shí)驗(yàn)組中HPV荷載量，分別檢測(cè)HPV6/11、16/18型病毒負(fù)荷量。結(jié)果判讀:SLAN熒光定量PCR檢測(cè)系統(tǒng)儀器Ct欄顯示40表示檢測(cè)樣本低于檢測(cè)限，報(bào)告為陰性;待測(cè)樣本Ct值≤38，且擴(kuò)增曲線呈典型S型，檢測(cè)結(jié)果報(bào)告為陽性;待測(cè)樣本Ct欄顯示在38～40之間，需重復(fù)測(cè)定，如仍在38～40之間，且擴(kuò)增曲線呈典型S型，則判斷為陽性;若非典型S型曲線，則判斷為陰性。所有數(shù)據(jù)通過統(tǒng)計(jì)軟件SP

5、SS13.0進(jìn)行處理，采用秩和檢驗(yàn)做差異性分析，兩組變量間的相關(guān)性用Spearman等級(jí)相關(guān)處理，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1尖銳濕疣HE染色結(jié)果
　　尖銳濕疣實(shí)驗(yàn)組標(biāo)本切片經(jīng)蘇木素、伊紅染色后低倍鏡下可見表皮層呈乳頭瘤樣增生;基底層細(xì)胞增生明顯，表皮棘層肥厚，棘層和顆粒層出現(xiàn)空泡化細(xì)胞;真皮淺層血管增生顯著，血管周圍可見有淋巴細(xì)胞浸潤(rùn);角化過度伴角化不全同時(shí)發(fā)生，其中最

6、顯著的是典型的空泡化細(xì)胞和乳頭瘤樣增生，為尖銳濕疣的經(jīng)典病理表現(xiàn)。
　　2正常對(duì)照組織、尖銳濕疣組織中p63蛋白表達(dá)
　　p63蛋白在免疫組織化學(xué)染色陽性表達(dá)時(shí)主要表達(dá)于細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒，少數(shù)細(xì)胞胞漿可呈弱陽性表達(dá)。34例尖銳濕疣組織中p63陽性表達(dá)34例，其中“+”為5例，“++”為12例，“+++”為17例，陽性表達(dá)率為100.0％(34/34);20例正常對(duì)照組織中19例為陽性表達(dá)，其中“+”為9例，“++”為7例

7、，“+++”為3例，陽性表達(dá)率為95.0％(19/20)?？梢娬＝M織和尖銳濕疣組織中p63均有表達(dá)。若以“+”、“++”為低表達(dá)，“+++”為過度表達(dá)[6]計(jì)算，尖銳濕疣組低表達(dá)陽性率為50.0％(17/34)，而對(duì)照組為80.0％(16/20);過度表達(dá)在尖銳濕疣組中占50.0％(17/34)，對(duì)照組為15.0％(3/20)。對(duì)比兩組數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)P63在尖銳濕疣組織中的表達(dá)水平與正常組織間有顯著差異（P＜0.01）(見Table1)。尖

8、銳濕疣組織中的陽性免疫染色主要在基底層、棘層、顆粒層，染色較深，呈彌漫性高表達(dá)（見Fig.4-5）;正常對(duì)照組織中染色較淺，主要表達(dá)于基底層，棘層和顆粒層表達(dá)較少或缺如，（見Fig.6）。對(duì)比全部標(biāo)本染色發(fā)現(xiàn)尖銳濕疣實(shí)驗(yàn)組標(biāo)本中的染色強(qiáng)度明顯高于對(duì)照組。
　　3尖銳濕疣組織中p63蛋白的表達(dá)在各臨床病理參數(shù)之間有無差異性
　　用統(tǒng)計(jì)學(xué)分別處理臨床病理各參數(shù)發(fā)現(xiàn)，尖銳濕疣組織中，p63蛋白的表達(dá)在性別、發(fā)病部位及年齡因素方面均

9、無差異。年齡＜35歲與年齡≥35歲兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);男性和女性兩組間P＞0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;p63蛋白在肛周和生殖器兩組別中的差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)（見Table2）。
　　4尖銳濕疣組織中p63蛋白表達(dá)與HPV6/11荷載量的關(guān)系
　　整理SLAN熒光定量PCR檢測(cè)儀得出的數(shù)據(jù)結(jié)果顯示:尖銳濕疣實(shí)驗(yàn)組34例中，單純HPV6/11亞型陽性者32例，單純HPV16/18亞型陽性者0例，兩者復(fù)

10、合陽性者為2例。本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，尖銳濕疣組織中HPV6/11亞型感染占絕大多數(shù)，對(duì)比尖銳濕疣實(shí)驗(yàn)組中HPV6/11荷載量與p63蛋白表達(dá)，經(jīng)數(shù)據(jù)處理，SPSS13.0軟件分析顯示兩者呈顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r=0.398，P=0.020，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(見Table3)。
　　結(jié)論:
　　1尖銳濕疣實(shí)驗(yàn)組中p63表達(dá)強(qiáng)度和范圍明顯高于正常對(duì)照組，其可能參與了尖銳濕疣皮膚代謝紊亂的調(diào)控，推測(cè)p63在尖銳濕疣癌變