前列地爾注射液對大鼠動(dòng)脈粥樣硬化病理模型干預(yù)作用的研究.pdf

1、動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是嚴(yán)重危害人類生命健康的慢性疾病，病變血管局部常常多種病理改變先后或同時(shí)出現(xiàn)，包括脂質(zhì)浸潤、復(fù)合糖類積聚、纖維組織增生、鈣化和動(dòng)脈中膜的退行性變等，晚期常伴有斑塊內(nèi)出血、斑塊破裂及局部血栓形成等。AS常常發(fā)生于重要器官的供血?jiǎng)用}，如心、腦、腎動(dòng)脈等，導(dǎo)致相應(yīng)器官的缺血性改變，如冠心病、腦卒中、腎動(dòng)脈狹窄等。
　　急性心肌梗死是AS所致疾病中最嚴(yán)重且死亡率最高者之一，動(dòng)脈粥樣硬化斑

2、塊破裂并繼發(fā)血栓形成是其發(fā)生的病理基礎(chǔ)。目前對急性心肌梗死的藥物防治仍在積極探索中，如何建立一種簡單、經(jīng)濟(jì)、可靠的動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型，對急性心肌梗死等心血管系統(tǒng)疾病的臨床研究具有十分重要的意義。
　　目前有一點(diǎn)是肯定的，即該病是由多種危險(xiǎn)因素長期、共同作用的結(jié)果。不同研究者從不同角度探討其發(fā)生機(jī)制而產(chǎn)生了許多學(xué)說，其中內(nèi)皮損傷或炎癥反應(yīng)學(xué)說得到大多數(shù)學(xué)者的認(rèn)可，認(rèn)為AS是一個(gè)包含大量炎癥介質(zhì)參與的炎癥性疾病，是動(dòng)脈內(nèi)膜對多種損傷

3、因子作出炎癥性反應(yīng)的結(jié)果，炎癥因子直接參與和調(diào)節(jié)AS的過程，影響AS的整個(gè)進(jìn)程，因此抗炎干預(yù)成為AS防治研究的熱點(diǎn)之一。丙二醛(Malondialdehyde，MDA)是炎癥性氧自由基刺激機(jī)體脂質(zhì)過氧化反應(yīng)產(chǎn)生的一種脂質(zhì)過氧化物，它的含量反映機(jī)體脂質(zhì)過氧化及炎癥程度，間接反映細(xì)胞損傷的程度，是目前常用的氧化炎癥指標(biāo)。
　　目的:本實(shí)驗(yàn)研究試圖通過新的方法建立一種方法簡單、容易成模且經(jīng)濟(jì)可靠的大鼠動(dòng)脈粥樣硬化病理模型，并通過觀察前列

4、地爾注射液對該模型的干預(yù)作用，探討其作用機(jī)制。
　　方法:健康雄性、7-8周齡、體重在180～220g的Sprague Dawley(SD)大鼠40只，所有大鼠均用普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后按完全隨機(jī)抽樣原則分為4組，每組10只:正?？瞻讓φ战M（A組）、模型組(B組）、前列地爾干預(yù)組（C組）、阿托伐他汀對照組（D組）。自第2周開始A組繼續(xù)飼喂普通飼料至第13周末，且在實(shí)驗(yàn)期間無任何干預(yù);B組給予高脂飼料+大量維生素D3腹腔注射+被動(dòng)

5、吸煙干預(yù);C組在高脂飼料+大量維生素D3腹腔注射+被動(dòng)吸煙的基礎(chǔ)上給予前列地爾注射液干預(yù)（將前列地爾注射液溶于0.9％氯化鈉注射液至20ml按5ug/kg.d腹腔注射，共給藥12周）;D組在高脂飼料+大量維生素D3腹腔注射+被動(dòng)吸煙的基礎(chǔ)上給予阿托伐他汀干預(yù)（將阿托伐他汀鈣片研碎后充分溶于0.9％氯化鈉注射液至20ml按5mg/kg.d灌胃，共給藥12周）。藥物干預(yù)均為每日下午進(jìn)行，四組大鼠每日充足飼料供給，自由飲水。干預(yù)完成后解剖各組

6、大鼠，在心尖左心室部取血2-3ml，檢測血中甘油三酯(triglycerides，TG)、總膽固醇(totalcholesterol，TC)、高密度脂蛋白膽固醇(hig-densitylipoprotein-cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low-densitylipoprotein-cholesterol，LDL-C)的濃度，并測定血清中氧化炎癥指標(biāo)MDA的含量。小心剝離主動(dòng)脈，取主動(dòng)脈根部上2-3cm的血管

7、，用4％多聚甲醛固定，常規(guī)脫水、包蠟、切片、染色，采用蘇木素-伊紅染色法，光鏡下觀察主動(dòng)脈的病理改變，并對比各實(shí)驗(yàn)組判斷模型制備情況及前列地爾注射液的干預(yù)效果。
　　結(jié)果:
　　1本實(shí)驗(yàn)采用高脂飼料+大量維生素D3分次腹腔注射+被動(dòng)吸煙的方法成功建立了動(dòng)脈粥樣硬化大鼠模型，共飼養(yǎng)大鼠40只，成活36只，死亡4只，死亡時(shí)間為第7周和第8周，4只死亡的大鼠分別在模型組2只，前列地爾干預(yù)組1只、阿托伐他汀對照組1只，死亡原因可能與

8、大鼠食欲下降、抵抗力差、腹瀉等有關(guān)。
　　2血脂檢測結(jié)果:A組血清TC(mmol/L)、LDL-C(mmol/L)水平分別為2.04±0.39、0.59±0.26，B組血清TC、LDL-C水平分別為18.20±0.55、8.29±0.49，C組血清TC、LDL-C水平分別為3.96±0.32、1.47±0.15，D組血清TC、LDL-C水平分別為3.99±0.46、1.48±0.35。A、B兩組間進(jìn)行比較，TC、LDL-C的P值均

9、＜0.05，B組血清TC、LDL-C水平均高于A組;B、C兩組間進(jìn)行比較，TC、LDL-C的P值均＜0.05，B組血清TC、LDL-C水平均高于C組;B、D兩組間進(jìn)行比較，TC、LDL-C的P值均＜0.05，B組血清TC、LDL-C水平均高于D組;C、D兩組間進(jìn)行比較，TC、LDL-C的P值均＞0.05，C、D組間無差異;A、C兩組間進(jìn)行比較，TC、LDL-C的P值均P＜0.05，A組血清TC、LDL-C水平均高于C組;A、D兩組間進(jìn)行

10、比較，TC、LDL-C的P值均＜0.05，A組血清TC、LDL-C水平均高于D組。
　　3 MDA檢測結(jié)果:A、B、C、D四組血清MDA(nmol/mlprot)水平分別為0.032±0.010、0.489±0.019、0.051±0.010、0.05540.013。A、B兩組間進(jìn)行比較，P＜0.05，B組血清MDA水平高于A組;B、C兩組間進(jìn)行比較，P＜0.05，B組血清MDA水平高于C組;B、D兩組間進(jìn)行比較，P＜0.05，B

11、組血清MDA水平高于D組;C、D兩組間進(jìn)行比較，P＞0.05，C、D組間無差異;A、C兩組間比較，P＜0.05，A組血清MDA水平高于C組;A、D兩組間進(jìn)行比較，P＜0.05，A組血清MDA水平高于D組。
　　4組織病理學(xué)改變:采用普通光學(xué)顯微鏡觀察各組大鼠病理切片，模型制備成功率為70％。A組大鼠主動(dòng)脈血管內(nèi)膜光滑，內(nèi)皮完整，內(nèi)膜及中層細(xì)胞排列規(guī)則，細(xì)胞周圍輪廓清晰，中層與平滑肌相間，排列整齊。B組可見主動(dòng)脈血管壁不光滑，內(nèi)皮連

12、續(xù)性破壞，內(nèi)膜增生、肥厚，有皺褶。中膜增厚，中膜細(xì)胞形態(tài)多樣，排列紊亂疏松，細(xì)胞間隙增寬，可見脂肪細(xì)胞及向內(nèi)層遷移的平滑肌細(xì)胞。C組大鼠主動(dòng)脈中膜平滑肌細(xì)胞輕度增生，排列較模型組整齊，未見泡沫細(xì)胞形成，內(nèi)皮損傷較輕，血管組織結(jié)構(gòu)趨于正常。D組大鼠主動(dòng)脈血管內(nèi)膜完整、內(nèi)皮未見明顯損傷，中膜及內(nèi)膜細(xì)胞排列較整齊，未見大量泡沫細(xì)胞形成，組織結(jié)構(gòu)已基本正常。與模型組相比前列地爾干預(yù)組及阿托伐他汀治療組動(dòng)脈粥樣硬化的形態(tài)學(xué)改變明顯減輕，具體表現(xiàn)為

13、藥物治療組的大鼠動(dòng)脈內(nèi)膜光滑且增殖明顯減輕，無突起及褶皺，中層平滑肌細(xì)胞增殖減輕，炎癥細(xì)胞浸潤減少。
　　結(jié)論:
　　本研究汲取以往各實(shí)驗(yàn)所長并強(qiáng)化多種危險(xiǎn)因素共同干預(yù)，選取高脂飼料+大量維生素D3分次腹腔注射+被動(dòng)吸煙的方法，制備了大鼠AS的模型，證實(shí)了AS是多種危險(xiǎn)因素長期共同作用的結(jié)果，高脂飲食、大量維生素D3、被動(dòng)吸煙均對AS的形成起促進(jìn)作用。前列地爾注射液可以調(diào)節(jié)AS大鼠的血脂紊亂，延緩炎癥反應(yīng)進(jìn)展，減輕AS大鼠主