缺氧誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡中BcL-2、Bax和NF-k B的表達(dá)及雌激素的作用.pdf

1、[目的]探討缺氧誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡中Bcl-2、Bax和NF-kB的表達(dá)，以及17β-雌二醇(E2)對(duì)缺氧心肌細(xì)胞的保護(hù)作用。
　　 [方法]Sprague-Dawley大鼠乳鼠(出生1-2d)心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)，待細(xì)胞生長良好時(shí)進(jìn)行藥物干預(yù)和缺氧刺激。將細(xì)胞分成四組，分別為C1（對(duì)照組）、C2（單純加藥組）、H1（單純?nèi)毖踅M）和H2（加藥缺氧組）。即C2、H2經(jīng)E2作用24h，之后H1、H2缺氧(5％CO2+95%N2)處理12h

2、，再進(jìn)行統(tǒng)一處理。采用MTT法檢測(cè)缺氧對(duì)心肌細(xì)胞活力和抑制率的影響及E2對(duì)缺氧心肌細(xì)胞的保護(hù)作用。采用Flowcytometry方法檢測(cè)心肌細(xì)胞的凋亡。采用WesternBlot技術(shù)檢測(cè)Bcl-2、Bax和NF-κB的表達(dá)變化。采用Real-TimePCR技術(shù)分析Bcl-2mRNA和BaxmRNA水平的表達(dá)變化。
　　 [結(jié)果]缺氧使心肌細(xì)胞活力下降，且對(duì)心肌細(xì)胞生長產(chǎn)生抑制，10-8、1O-7mol/LE2可以提高心肌細(xì)胞活力

3、，逆轉(zhuǎn)缺氧對(duì)心肌細(xì)胞生長的抑制作用。缺氧加重心肌細(xì)胞凋亡，使心肌細(xì)胞Bax蛋白、BaxmRNA、NF-κB蛋白的表達(dá)升高，Bcl-2蛋白、Bcl-2mRNA的表達(dá)降低，而經(jīng)10-7mol/L17β-雌二醇預(yù)處理的缺氧心肌細(xì)胞較單純?nèi)毖踅M心肌細(xì)胞Bax蛋白、BaxmRNA、NF-κB蛋白的表達(dá)降低，Bcl-2蛋白、Bcl-2mRNA表達(dá)升高。
　　 [結(jié)論]缺氧對(duì)心肌細(xì)胞生長具有一定的抑制作用，還促進(jìn)心肌細(xì)胞的凋亡，且使Bcl-2