過量表達(dá)AtLEC1和AtMYB118基因改良花生籽粒含油量的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)以豐花1號(hào)為轉(zhuǎn)基因受體，利用不同長度種子特異表達(dá)啟動(dòng)子NapinA在花生籽粒中過量表達(dá)擬南芥AtLEC1和AtMYB118基因。
　　利用普通PCR和第二代高通量測(cè)序技術(shù)，對(duì)花生轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行了初步篩選，得到了2個(gè)具p230啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的AtLEC1轉(zhuǎn)基因花生株系2011030801和2011031001;1個(gè)由全長NapinA啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的AtLEC1轉(zhuǎn)基因花生株系2011072503;以及2個(gè)p270啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的AtMYB1

2、18轉(zhuǎn)基因花生株系2011040603和2011040201。
　　通過QRT-PCR以及Western Blot分析了轉(zhuǎn)基因花生中AtLEC1和AtMYB118基因在轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平上的表達(dá)。選取果針入土后15d、30d和60d三個(gè)時(shí)期的種子，利用QRT-PCR的方法對(duì)轉(zhuǎn)基因籽粒中部分脂肪酸生物合成和油脂積累相關(guān)的基因以及糖代謝相關(guān)基因表達(dá)情況進(jìn)行了分析，結(jié)果表明:轉(zhuǎn)入AtLEC1基因的花生在果針入土15d的種子中各個(gè)基因的表

3、達(dá)水平都相對(duì)較低，與對(duì)照豐花1號(hào)相比差異不大;60d時(shí)，轉(zhuǎn)基因花生中大多數(shù)測(cè)定基因的表達(dá)顯著上調(diào)，包括AhaccAⅡ、AhBccp1、AhBc4、AhKASⅡ、AhSAD、 AhDGAT1-1、AhDGAT2a、AhO1e2等。糖代謝相關(guān)基因AhSuSy的表達(dá)量與對(duì)照相比在30d時(shí)顯著降低，60d時(shí)的表達(dá)量進(jìn)一步降低。轉(zhuǎn)入AtMYB118基因的花生與對(duì)照相比較，AhSAD和AhSuSy這兩個(gè)基因在果針入土15-30d的種子中的表達(dá)顯著上

4、調(diào);轉(zhuǎn)基因花生脂肪酸合成相關(guān)基因AhBccp1、AhBc4和AhKASⅡ分別在30d和60d時(shí)轉(zhuǎn)錄水平顯著提高;而在60d時(shí)，除AhO1e3、 AhSAD和AhSuSy表達(dá)降低外，其余8個(gè)基因的表達(dá)均比對(duì)照明顯增強(qiáng)。
　　利用近紅外反射光譜、索氏提取法和GC MS對(duì)轉(zhuǎn)基因花生籽粒的含油量、脂肪酸含量和組成進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)不同轉(zhuǎn)基因花生株系籽粒含油量均明顯提高，最高的比對(duì)照提高了20.2％?；ㄉ蚜Ｖ泻孔罡叩?種脂肪酸中，油酸、硬