貴州正安野木瓜抗菌活性成分研究.pdf

1、目的：研究正安野木瓜抗菌活性作用，優(yōu)化抗菌粗提物提取工藝，分離純化抗菌活性物質(zhì)及鑒定結(jié)構(gòu)。
　　 方法：本實(shí)驗(yàn)以正安野木瓜果實(shí)為主要原材料，以牛津杯法檢測測試物抗菌活性。(1)鑒定正安野木瓜果實(shí)和葉片PBS浸提物對7種致病菌的抑菌作用。(2)以石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、60％乙醇、95％乙醇和ddH2O等七種不同極性的溶劑為提取溶劑，研究溶劑因素對野木瓜果實(shí)抗菌粗提物提取率的影響。以60％乙醇為提取溶劑，單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)

2、考察液料比、溫度及提取時間對野木瓜果實(shí)抗菌粗提物提取率的影響，確定合適的提取工藝。(3)研究不同溶劑對野木瓜果實(shí)粗提物抗菌活性的影響。(4)二倍稀釋法和牛津杯法研究野木瓜果實(shí)60％乙醇粗提物(ethanolcrude extract，ECE)抗菌性能及其穩(wěn)定性。(5)采用含藥的RL-J培養(yǎng)基測定方法，檢測ECE抗結(jié)核桿菌活性。(6)采用活性跟蹤法、萃取和硅膠柱層析技術(shù)對ECE中的抗菌活性物質(zhì)進(jìn)行分離純化。從乙醚萃取物中分離得到抗菌活性組

3、分Ⅱ②-1，采用氣相-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析和初步鑒定組分Ⅱ②-1中所含的化合物及其結(jié)構(gòu)。
　　 結(jié)果：1，正安野木瓜果實(shí)PBS浸提物對七種測試菌具有較好的抗菌活性，而葉片無活性。2，60％乙醇作為提取溶劑時，野木瓜果實(shí)抗菌粗提物提取率最高。液料比和溫度對野木瓜果實(shí)抗菌粗提物提取率的影響較大；60％乙醇為提取溶劑時的最佳工藝為：液料比2.5:1，浸提溫度70℃，時間2h。在該條件下，提取率為8.49％。3，ddH2O、60％乙醇、95

4、％乙醇、丙酮和乙酸乙酯五種提取物濃度在100 mg/ml時對試驗(yàn)細(xì)菌均有抑菌活性，而氯仿和石油醚提取物無活性。七種溶劑提取物在100 mg/ml時對新生隱球菌均無抑菌作用。4，ECE對金黃色葡萄球菌、傷寒沙門氏菌、大腸桿菌、乙型副傷寒沙門氏菌、銅綠假單胞菌和枯草芽孢桿菌都有很好的抑菌作用，其最低殺菌濃度(MBC)分別為25 mg/ml、25 mg/ml、50 mg/ml、50 mg/ml、12.5 mg/ml和>200mg/ml，最低抑

5、菌濃度(MIC)分別為25 mg/ml、25 mg/ml、25 mg/ml、25mg/ml、12.5 mg/ml和25 mg/ml。同時50mg/ml和25mg/ml ECE對結(jié)核桿菌H37Rv具有抑制生長作用。5，ECE的抗菌作用隨濃度降低而減弱，其濃度的自然對數(shù)與抑菌圈面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，符合典型的抗生素作用方程。6，ECE經(jīng)100℃加熱60min和121℃處理30min，其抗菌作用幾乎沒有受到影響，同時低溫保存對其抗菌活性也無

6、影響。7，從乙醚萃取物中分離純化出具有抗菌活性組分Ⅱ②-1，它的主要成分為鄰苯二甲酸二異辛酯，純度為95.389％。100 mg/mlⅡ②-1溶液對金黃色葡萄球菌、傷寒沙門氏菌、大腸桿菌、乙型副傷寒沙門氏菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌和陰溝桿菌有顯著的抑菌作用，其抑菌圈直徑在18.0～29.0mm之間。
　　 結(jié)論：(1)正安野木瓜果實(shí)對常見致病菌有抗菌活性，其60％乙醇提取物(ECE)抗菌譜廣，抗菌活性強(qiáng)，且熱穩(wěn)定性好。提示正