肺結(jié)核性與腺癌性胸水的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、肺結(jié)核性胸水和肺腺癌性胸水是臨床最常見(jiàn)的兩種胸水。這兩種胸水的鑒別目前臨床多采用多指標(biāo)檢測(cè)綜合分析方法，但各種指標(biāo)的敏感性及特異性都不盡相同。有近20％的結(jié)核性和癌性胸水，在臨床經(jīng)全面檢查仍難以鑒別。如何鑒別這兩種胸水，是目前臨床上的一大難點(diǎn)。 SDS-PAGE可在電場(chǎng)作用下，將全部蛋白質(zhì)依據(jù)蛋白質(zhì)亞基的分子量大小進(jìn)行分離。目前SDS-PAGE技術(shù)已用于臨床尿液、血液等的分離，通過(guò)對(duì)比電泳條帶的不同用于相關(guān)疾病的鑒別。目前尚未

2、見(jiàn)此方法用于分離胸水蛋白質(zhì)的報(bào)道，也未見(jiàn)用于肺結(jié)核性胸水與腺癌性胸水的診鑒。 胸水中包含了血漿蛋白和來(lái)自肺組織的蛋白，肺結(jié)核性胸水與肺腺癌性胸水中也包含有各自疾病的特有蛋白。兩種胸水的蛋白質(zhì)差異，既往的研究主要涉及某些具體蛋白成分在肺癌性或結(jié)核性胸水中的變化規(guī)律，未見(jiàn)兩種胸水中總體蛋白質(zhì)的比較研究。蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展為體液的研究提供了很好的技術(shù)平臺(tái)，涉及血漿、血清、腦脊液、尿液、唾液等體液的蛋白質(zhì)組學(xué)研究正蓬勃發(fā)展。目前對(duì)于體液蛋

3、白質(zhì)組學(xué)的研究方興未艾，血漿或血清蛋白質(zhì)組學(xué)研究較多，胸水蛋白質(zhì)組學(xué)國(guó)內(nèi)外報(bào)道很少。而胸水成分雖然與血漿相似，但是由于局限于胸腔的病變有其自身的特點(diǎn)，所以與血漿成分還有較多的差別。胸水蛋白質(zhì)組學(xué)的研究可深化對(duì)胸腔內(nèi)疾病的認(rèn)識(shí)。 拉曼光譜是光子與分子之間非彈性散射所產(chǎn)生的散射光譜。拉曼光譜分析方法具有非破壞性優(yōu)點(diǎn)，是很重要的分子結(jié)構(gòu)分析手段。表面增強(qiáng)拉曼散射（SERS）技術(shù)可研究界面與表面吸附分子例如生物大分子脫氧核糖核酸和蛋白質(zhì)

4、等的排列取向及結(jié)構(gòu)，可以直接用于分析水相生物分子的結(jié)構(gòu)狀態(tài)且所需樣品用量很少。拉曼光譜學(xué)技術(shù)已廣泛應(yīng)用于化學(xué)、材料、環(huán)境、考古以及生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域，并在多個(gè)領(lǐng)域得到了迅速的發(fā)展。在腫瘤研究領(lǐng)域，拉曼光譜已應(yīng)用于病理組織切片、細(xì)胞、血液樣本等的研究，運(yùn)用拉曼光譜方法檢測(cè)胸水樣本尚未見(jiàn)有報(bào)道。 研究目的: 從蛋白質(zhì)水平揭示肺結(jié)核性胸水與肺腺癌性胸水的差異，為兩者胸水的鑒別診斷研究奠定基礎(chǔ)。 研究方法: 1．收集

5、南方醫(yī)院2007年7月至2008年10月的160例胸水，其中肺結(jié)核性胸水45例，肺腺癌性胸水47例。每例均經(jīng)組織病理學(xué)、細(xì)胞病理學(xué)或結(jié)合臨床資料證實(shí)。 BCA法測(cè)定每例胸水的蛋白濃度，并比較肺結(jié)核性與腺癌性胸水的蛋白濃度。 2．采用SDS-PAGE電泳技術(shù)分離肺結(jié)核性與腺癌性胸水中的蛋白質(zhì)：選用28例肺結(jié)核性胸水及36例肺腺癌性胸水，每例均以5％濃縮膠和不同濃度（6％、8％、10％、12％、15％）之分離膠行SDS-P

6、AGE分離胸水中蛋白質(zhì)，考馬斯亮藍(lán)染色，AlphaEaseFC Stand Alone圖像分析軟件分析10％分離膠凝膠圖像。 3．肺結(jié)核性與腺癌性胸水的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究：45例肺結(jié)核性及47例肺腺癌性胸水分別等體積混合后，離心去除細(xì)胞成分、去除高豐度白蛋白和IgG、丙酮沉淀除鹽、Bradford法測(cè)定蛋白濃度。兩種胸水分別取等質(zhì)量進(jìn)行雙向電泳。ImageMaster2D Platinum圖像分析軟件分析凝膠圖像、找出差異蛋白質(zhì)

7、點(diǎn)，進(jìn)而質(zhì)譜鑒定這些差異蛋白質(zhì)。 4．肺結(jié)核性與腺癌性胸水SERS圖譜比較：取13例肺結(jié)核性胸水及16例腺癌性胸水，用SERS方法比較兩者SERS圖譜拉曼峰的不同，并對(duì)差異峰進(jìn)行診斷試驗(yàn)評(píng)價(jià)。 研究結(jié)果: 1．BCA法測(cè)定肺結(jié)核性胸水和肺腺癌性胸水的蛋白濃度分別為（68．77±14．41）mg/mL和（54．92±10．24）mg/mL，肺結(jié)核性胸水的蛋白濃度高于肺腺癌性胸水，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）。

8、 2．SDS-PAGE圖譜分析表明，肺結(jié)核性胸水50KD-60KD分子量范圍內(nèi)的蛋白含量高于肺腺癌性胸水，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）。 3．兩類胸水經(jīng)雙向電泳分離、篩選，質(zhì)譜鑒定出6種差異蛋白質(zhì)，其中肺腺癌性胸水Apolipoprotein D、Ficolin-3、Serotransferrin、Complement C4-B的含量高于肺結(jié)核性胸水，plasma retinol-binding protein、A

9、lpha-1-antitrypsin的含量低于肺結(jié)核性胸水。 4．肺結(jié)核性胸水和肺腺癌性胸水的拉曼光譜圖譜基本一致，肺結(jié)核性胸水的拉曼強(qiáng)度高于肺腺癌性胸水；以拉曼峰（1282．74 cm-1）的出現(xiàn)作為診斷肺腺癌性胸水的診斷指標(biāo)，其診斷的靈敏度為68．75％，特異度為84．61％，標(biāo)準(zhǔn)化陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為70．25％，標(biāo)準(zhǔn)化陰性預(yù)測(cè)值為79．52％，標(biāo)準(zhǔn)化誤診率為25．98％，標(biāo)準(zhǔn)化準(zhǔn)確度為74．02％，可用于肺結(jié)核性胸水與肺腺癌性胸

10、水兩者的輔助鑒別診斷。 結(jié)論: 肺結(jié)核性胸水與肺腺癌性胸水蛋白質(zhì)組學(xué)方面具有明顯差異，表現(xiàn)在： 1．肺結(jié)核性胸水的蛋白濃度高于肺腺癌性胸水，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）； 2．肺結(jié)核性胸水50KD-60KD分子量范圍內(nèi)的蛋白含量高于肺腺癌性胸水，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）； 3．肺腺癌性胸水Apolipoprotein D、Ficolin-3、Serotransferrin、COmp