脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)急性骨髓型放射病治療的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目前,隨著國(guó)內(nèi)外對(duì)急性放射病(acute radiation sickness,ARS)發(fā)病機(jī)制、實(shí)驗(yàn)治療等基礎(chǔ)性研究的逐步深入,輸血、細(xì)胞因子治療和干細(xì)胞移植等技術(shù)也已經(jīng)在臨床應(yīng)用上逐步推廣開來(lái)。但是,這些治療方法在不同程度上都具有一定的局限性,這就在一定程度上影響治療的效果,也就迫使人們尋找新的行之有效的治療方法。自Zuk等人在2001年從人脂肪組織中成功分離出脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(human adipose derived stem

2、cells,hADSCs),繼而發(fā)現(xiàn)ADSCs因其具有多項(xiàng)分化潛能、造血支持和促進(jìn)干細(xì)胞植入、免疫調(diào)控和自我復(fù)制等多項(xiàng)生物學(xué)特點(diǎn),并且其來(lái)源廣泛、取材方便而日益受到人們的關(guān)注。目前有研究發(fā)現(xiàn)作為一種重要的間充質(zhì)干細(xì)胞,脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow stem cells,BMSCs)具有相似的生物學(xué)特性和多分化潛能[3],能否將其替代BMSCs用于治療ARS,成為我們感興趣的研究?jī)?nèi)容。我們從小鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)

3、胞的分離培養(yǎng)、骨髓型ARS模型的制備和脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療三個(gè)方面進(jìn)行了研究,為今后脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在急性放射病治療方面提供基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn)材料。
　　第一部分，工作是對(duì)小鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)。我們改進(jìn)了脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法。選用3周齡左右的昆明種小鼠,無(wú)菌條件下取出附睪部位脂肪,采用胰蛋白酶和Ⅰ型膠原酶同時(shí)消化小鼠的附睪脂肪的方法獲得了大量的細(xì)胞,采用多次反復(fù)貼壁培養(yǎng)的方法純化細(xì)胞,并在培養(yǎng)基中加入了堿性成纖維細(xì)

4、胞生長(zhǎng)因子(basic fibrolast growth factor recombinant,bFGF)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng),從而建立了穩(wěn)定的體外ADSCs培養(yǎng)和擴(kuò)增體系。通過觀察描述了ADSCs原代及多次傳代后的形態(tài)特征,同時(shí)繪制了第三代ADSCs的生長(zhǎng)曲線,觀察其增殖特性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞取材及其分離方法較為簡(jiǎn)單,細(xì)胞較易貼壁,多為呈梭形和三角形生長(zhǎng),細(xì)胞生長(zhǎng)活躍,7天左右可達(dá)到80%-90%融合,此時(shí)觀察細(xì)胞多呈漩渦狀。多

5、次傳代培養(yǎng)后,細(xì)胞形態(tài)逐漸趨于一致,多呈梭形。10ng/mL的bFGF促進(jìn)細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),縮短了細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間,使細(xì)胞7天左右即可傳一代。細(xì)胞可長(zhǎng)時(shí)間反復(fù)傳代培養(yǎng),其生長(zhǎng)曲線為S形。
　　第二部分，工作是制備骨髓型ARS模型。對(duì)三周齡左右的雄性SD大鼠進(jìn)行總劑量分別為4Gy和7Gy的一次性全身照射,在照射后第0、2、4、9、16、29天尾靜脈采血檢測(cè)大鼠外周血象的變化,并在細(xì)胞移植后第5、12、34天各組分別處死5只大鼠,腹主動(dòng)脈采血

6、檢測(cè)血清生化指標(biāo)變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:大鼠受到輻照后外周血中白細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板數(shù)量明顯減少,且與受照的劑量呈正相關(guān);
　　第三部分，工作是ADSCs移植治療。選用培養(yǎng)至第三代的ADSCs用生理鹽水重懸至濃度為1×106/mL,在照射后6h對(duì)大鼠進(jìn)行尾靜脈輸注,為期一周。在照射后第0、2、4、9、16、29天尾靜脈采血檢測(cè)大鼠外周血象的變化,并在細(xì)胞移植后第5、12、34天各組分別處死5只大鼠,腹主動(dòng)脈采血檢測(cè)血清生化指標(biāo)變化。實(shí)