芥子氣染毒小鼠皮膚基底細胞的增殖動力學行為研究.pdf

1、我們開展了該項研究,以期了解芥子氣損傷皮膚基底細胞增殖動力學的變化特點,并為從改善干細胞微環(huán)境、促進干細胞的增殖分化角度,探索促進芥子氣損傷皮膚愈合的新途徑以及干細胞移植療法的建立奠定了基礎,具體工作如下:1.芥子氣對小鼠皮膚基底細胞增殖動力學的影響 該研究采用胰蛋白酶消化法急性分離小鼠耳廓表皮細胞,通過免疫組化及流式細胞術等方法檢測證實分離得到的細胞主要是β1整合素陽性細胞,即表皮基底細胞.采用PI染色流式細胞術觀察了芥子氣染毒后小鼠

2、表皮基底細胞增殖周期的時效及量效關系.當染毒濃度為32mg/mL芥子氣時,48h之前細胞周期未發(fā)生明顯的改變,而染毒后48h出現(xiàn)S及G<,2>/M期細胞增多的現(xiàn)象;當染毒劑量增至160mg/mL及320mg/mL時,在染毒后72h均出現(xiàn)明顯的亞二倍體峰即凋亡峰,并呈現(xiàn)出一定的量效、時效關系.2.芥子氣對小鼠表皮干細胞的影響 該研究利用表皮干細胞具有慢周期性的特點,采取5-溴脫氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxyuridine,BrdU

3、)標記滯留術進行表皮干細胞的分離鑒定.3.小鼠表皮基底細胞培養(yǎng)條件的初步探索 該研究主要采用以下三種方法:組織塊培養(yǎng)法、有血清培養(yǎng)法(無滋養(yǎng)層)、有血清培養(yǎng)法(有滋養(yǎng)層).a.組織塊培養(yǎng)法在接種后2天可見表皮基底細胞呈膜狀移行生長,細胞呈扁平不規(guī)則多角形,彼此緊密相連成單層膜.7天表皮細胞成片生長呈典型的"鋪路石"狀,并在生長過程中形成特異性的"拉網(wǎng)"現(xiàn)象.b.采用有血清培養(yǎng)液,單純多聚賴氨酸鋪被培養(yǎng)皿,以胰蛋白酶消化法獲得的小鼠耳廓表