microRNAs在胰腺癌發(fā)生與早期診斷中的應(yīng)用.pdf

1、背景:胰腺癌起病隱匿，進展迅速，預(yù)后極差，大多數(shù)的胰腺癌病人出現(xiàn)癥狀時已屬晚期，失去了手術(shù)根治的機會，其死亡率位居腫瘤的第四位，術(shù)后總體5年生存率不超過5％，但早期胰腺癌的治療效果卻非常好，術(shù)后5年生存率最多可達100％。胰腺癌早期診斷率低，目前醫(yī)學(xué)界尚缺乏較為特異的胰腺癌早期篩查手段，傳統(tǒng)的輔助檢查，如增強CT/MRI，血清標(biāo)記物CA19-9、CA242、CEA、AFP及K-ras突變等并不能在早期診斷中起到很大作用，因此早期診斷十分

2、困難。95％以上的胰腺癌患者在明確診斷時腫瘤已屬晚期，失去了手術(shù)根治的機會。為了進一步提高手術(shù)切除率，提高總體治療效果及改善遠期預(yù)后，胰腺癌的早期診斷顯得尤為重要，因此尋找胰腺癌的早期診斷方法成為當(dāng)今研究的一大熱點。
　　 近年來，人們在研究中發(fā)現(xiàn)，microRNAs(miRNAs)是穩(wěn)定存在于外周血中一種候選的腫瘤標(biāo)志物，同時與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)。miRNA是一類廣泛存在于真核生物中的具有調(diào)控功能的非編碼小分子RNA，含有約18

3、～22個核苷酸。miRNAs常以堿基對相互原則與靶信使RNA(mRNA)的3'端的非翻譯區(qū)完全或不完全配對，降解靶信使RNA或抑制其表達而阻遏其轉(zhuǎn)錄后翻譯。對組織分化、細胞分化、凋亡等正常的生理過程起到重要的調(diào)控作用。目前許多研究證實了miRNAs與胰腺腫瘤發(fā)生的相關(guān)性，并且發(fā)現(xiàn)不同階段的腫瘤，miRNAs的表達有顯著差異。miRNAs表達的組織特異性，是其成為診斷性生物標(biāo)志物的前提。同時，miRNAs在血漿、胰液、糞便等多處穩(wěn)定存在，

4、因此miRNAs有可能成為一種穩(wěn)定、靈敏的胰腺癌早期診斷標(biāo)志物。
　　 目的:在胰腺癌中，尋找具有潛在早期診斷價值的外周血特異性miRNAs，探索胰腺癌發(fā)生過程中相關(guān)的miRNAs水平的動態(tài)變化。探索miRNAs對于胰腺癌早期診斷的價值。
　　 方法:
　　 1.通過化學(xué)致癌劑二甲基苯并蒽（7，12-dimethylbenzanthraene，DMBA）胰腺原位包埋誘導(dǎo)建立SD大鼠胰腺癌動物模型。
　　

5、2.利用TaqmanmiRNA芯片對胰腺癌大鼠動物建模過程中的各時間點的胰腺組織進行檢測，初步篩選其差異表達microRNA。
　　 3.應(yīng)用STC(SeriesTestofCluster)工具對差異表達microRNA進行時間趨勢顯著性分析，篩選得到顯著性的miRNA表達趨勢。
　　 4.應(yīng)用生物信息學(xué)方法TargetScan軟件確定microRNAs所對應(yīng)的靶基因，確定與腫瘤相關(guān)的靶基因。
　　 5.對篩選出

6、的有意義的miRNA進行驗證研究。
　　 結(jié)果:
　　 1.采用5mg劑量的二甲基苯并蒽(DMBA)直接置入胰腺被膜下，成功誘導(dǎo)大鼠胰腺癌發(fā)生，成癌率高，非實驗性意外死亡率低。DMBA實驗組術(shù)后2周癌發(fā)生率為37.5％(6/16)，并伴有3例中級別PanIN;術(shù)后1個月癌發(fā)生率達到76.5％(13/17)。
　　 2.miRNA芯片技術(shù)對比檢測正常胰腺、DMBA實驗組2周和1月組間miRNA總體表達水平的改變情況

7、。利用倍數(shù)法篩選出人鼠同源差異表達的miRNA，2周和1月的胰腺組織中均篩選出20條，2周和1月外周血中分別篩選出27條和14條。
　　 3.利用STC對miRNA表達趨勢進行分析，一共得到16中表達趨勢，根據(jù)P-value判斷有顯著性差異的趨勢，并找到各趨勢所對應(yīng)的miRNA，最終得到組織中35條有意義的miRNAs，血中12條有意義的miRNAs。
　　 4.利用TargetScan軟件對所篩選出的miRNA進行靶基