Bacillus cereus B-02對Botrytis cinerea抑菌活性及拮抗機制的研究.pdf

1、采用平板培養(yǎng)法和瓊脂孔擴散法檢測蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)B-02的抑菌活性，觀察到B-02菌株及其代謝產物對灰霉病致病菌灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)均有明顯的、不同程度的抑菌作用，其中，不同稀釋濃度Ba. cereus B-02過濾液對Bo. cinerea菌絲生長有明顯的抑制作用，并且起主要抑菌作用。在24～48h內B-02可以通過生防菌代謝產物在培養(yǎng)基中的擴散而對靶標真菌形成一定寬度的抑菌帶。

2、抑菌帶旁的菌絲均不能正常向四周生長，導致菌絲在菌落中央堆積，顏色加深，呈灰褐色或黑褐色。 鑒于Ba. cereus B-02胞外物質對病原真菌起主要抑菌作用，因而嘗試用分離大分子蛋白質類物質常用的方法——(NH<,4>)<,2>SO<,4>沉淀法和乙醇沉淀法來提取抑菌活性成分，得到的沉淀部分均無抑菌活性，觀察到抑菌活性成分仍存在于上清液中。菌株發(fā)酵液在121℃高溫滅菌30min后對病原菌仍具有較強的抑菌作用，說明B-02抑菌活性

3、成分具有良好的熱穩(wěn)定性。 為研究培養(yǎng)條件對Ba. cereus B-02菌株生長和抑菌活性的影響，分別采用分光光度計法、瓊脂孔擴散法和杯碟法測定了B-02菌株的菌體量和抑菌活性。系統(tǒng)研究了B-02在不同液體培養(yǎng)基中的生長曲線、pH值和抑菌活性的變化，表明NB培養(yǎng)基較適合于液體搖培，其菌量達到高峰的時期是16h之后且抑菌帶寬度達到5mm。同時，B-02菌株在裝液量50ml/250ml和接種量1％(0.5ml/50ml)、搖床轉速1

4、40r/min，32℃，初始pH9.0的NB培養(yǎng)液中振蕩培養(yǎng)36h，其代謝產物的抑菌活性作用最為明顯，較初始培養(yǎng)條件增加了16.2％。 借助光學顯微鏡、掃描電子顯微鏡、透射電子顯微鏡和激光掃描共聚焦顯微鏡，從細胞形態(tài)學和生理學水平上研究Ba. cereus B-02過濾液對Bo. cinerea的拮抗機理。結果表明，B-02的代謝物質能夠明顯抑制病菌孢子萌發(fā)，一定濃度下可以使菌絲畸形，細胞崩解，內含物外泄，最終導致病菌喪失繁殖能