脈絡(luò)膜新生血管膜與VEGF、PEDF的相關(guān)病理機(jī)制及臨床治療研究.pdf

1、本研究分為三部分: 第一部分曲安奈德對(duì)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞VEGF、PEDF表達(dá)的影響 [目的]觀察曲安奈德(triamcinoloneacetonide，TA)對(duì)培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(humanretinalpigmentepithelial，ARPE19)和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(humanumbilicalveinendothelial，HUVE)的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascularendothe

2、lialgrowthfactor，VEGF)和色素上皮衍生因子(pigmentepithelium-derivedfactor，PEDF)表達(dá)的影響，以探討曲安奈德和VEGF、PEDF的關(guān)聯(lián)。 [方法]選用培養(yǎng)的ARPE19和HUVE細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組應(yīng)用濃度為0.1mg/ml和1mg/ml曲安奈德混合培養(yǎng)液，對(duì)照組應(yīng)用曲安奈德藥物添加劑混合培養(yǎng)液。收集實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組加入曲安奈德或藥物添加劑后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)(0，10分鐘，30分鐘，1小時(shí)

3、，3小時(shí)，6小時(shí)，12小時(shí)，24小時(shí)，2天和3天)的細(xì)胞和培養(yǎng)液。提取細(xì)胞的總RNA，RNA逆轉(zhuǎn)錄后，采用實(shí)時(shí)反轉(zhuǎn)錄定量PCR法(RealtimeReverseTranscriptionPolymeraseChainReaction，RealtimeRT-PCR)測(cè)定細(xì)胞的VEGF、PEDF的mRNA表達(dá)。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)培養(yǎng)液中的VEGF，P

4、EDF含量。 [結(jié)果]對(duì)于ARPE19細(xì)胞，實(shí)時(shí)RT-PCR的結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組之間VEGF165和PEDFmRNA的表達(dá)差異有顯著性。加入TA后3小時(shí)，實(shí)驗(yàn)組VEGF165的mRNA表達(dá)顯著低于對(duì)照組，為對(duì)照組的0.5±0.05倍(P=0.00012)。實(shí)驗(yàn)組PEDF的mRNA表達(dá)則高于對(duì)照組，為對(duì)照組的2.5±0.07倍(P＜0.0001)。TA兩個(gè)不同濃度對(duì)VEGF和PEDF的表達(dá)水平的影響無(wú)顯著性差異，但兩組作用的持

5、續(xù)時(shí)間有顯著性差異，0.1mg/ml濃度的TA作用持續(xù)時(shí)間為12小時(shí)(P=0.00018)，1mg/ml濃度的TA作用持續(xù)時(shí)間為24小時(shí)(P=0.0007)。ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，培養(yǎng)液中VEGF和PEDF的蛋白表達(dá)與其細(xì)胞內(nèi)的mRNA的表達(dá)相一致，加入TA3小時(shí)后，培養(yǎng)液中VEGF165的含量明顯低于對(duì)照組(P=0.001)，而PEDF含量較對(duì)照組顯著升高(P=0.002)。 TA對(duì)HUVE細(xì)胞VEGF165和PEDFmRN

6、A表達(dá)的影響與ARPE19細(xì)胞相似。實(shí)時(shí)RT-PCR的結(jié)果顯示，加入TA后3小時(shí)，實(shí)驗(yàn)組VEGF165的mRNA表達(dá)顯著低于對(duì)照組，為對(duì)照組的0.5±0.05倍(P=0.0006)。實(shí)驗(yàn)組PEDF的mRNA表達(dá)則高于對(duì)照組，為對(duì)照組的2.2±0.06倍(P=0.00005)。然而HUVE細(xì)胞培養(yǎng)液中的VEGF165含量很少，低于100pg/ml，PEDF的含量低于檢測(cè)濃度(＜1ng/ml)，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組之間無(wú)顯著性差異。 [結(jié)

7、論]TA能抑制ARPE19和HUVE細(xì)胞VEGF的表達(dá)，同時(shí)促進(jìn)兩種細(xì)胞PEDF的表達(dá)。 第二部分脈絡(luò)膜新生血管患者房水中VEGF和PEDF的含量測(cè)定 [目的]研究血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)和色素上皮衍生因子(pigmentepithelium-derivedfactor,PEDF)在活動(dòng)性脈絡(luò)膜新生血管膜(choroidalneovascularizat

8、ion，CNV)患者房水中的表達(dá)。初步探討息肉狀脈絡(luò)膜血管病變(polypoidalchoroidalvasculopathy，PCV)和其他類型的CNV患者房水中的VEGF和PEDF的表達(dá)。 [方法]應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)法，檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組：包括12例12眼年齡相關(guān)性黃斑變性活動(dòng)性CNV患者(AMD組)，9例9眼病理性近視活動(dòng)性CNV患者(近視組)，11例

9、11眼活動(dòng)性PCV患者(PCV組)；以及對(duì)照組：同期年齡對(duì)照的10例白內(nèi)障患者的房水標(biāo)本中VEGF,PEDF的含量。 [結(jié)果]實(shí)驗(yàn)組房水中的VEGF含量為523.0±273.7pg/ml，對(duì)照組房水中的VEGF含量為108.3±72.3pg/ml。兩組相比差異有極顯著性意義(P＜0.001)。其中PCV組房水中的VEGF含量為402.8±229.9pg/ml，AMD組房水中的VEGF含量為668.9±340.0pg/ml，近視組

10、房水中的VEGF含量為475.31±102.8pg/ml。各組分別與對(duì)照組相比，均有極顯著性差異。(P=0.001，P＜0.001，P＜0.001).PCV組房水中的VEGF含量顯著低于AMD組(P=0.045)，與近視組無(wú)顯著性差異(P=0.394)。 實(shí)驗(yàn)組房水中的PEDF含量為16.58±13.11ng/ml，對(duì)照組房水中的PEDF含量為0.35±0.57ng/ml，兩者相比差異有極顯著性意義(P=0.000)。其中PCV

11、組房水中的PEDF含量為10.85±6.36ng/ml，AMD組房水中的PEDF含量為20.68±7.27ng/ml，近視組房水中的PEDF含量為18.11±21.68ng/ml。各組分別與對(duì)照組相比，均顯著高于對(duì)照組。(P＜0.001，P＜0.001，P=0.019)。PCV組房水中的PEDF含量顯著低于AMD組(P=0.002)，與近視組無(wú)顯著性差異(P=0.302)。各樣本的VEGF和PEDF呈顯著的正相關(guān)(r=0.388，P=0

12、.028)。 [結(jié)論]各型活動(dòng)性CNV患者和PCV患者房水中的VEGF，PEDF含量均顯著高于對(duì)照組，PCV和AMD脈絡(luò)膜新生血管膜患者房水中的VEGF和PEDF含量有所不同。 第三部分光動(dòng)力療法聯(lián)合玻璃體腔注射曲安奈德治療年齡相關(guān)性黃斑變性中心凹下脈絡(luò)膜新生血管膜的臨床研究 [目的]探討光動(dòng)力療法(photodynamictherapy，PDT)聯(lián)合玻璃體腔注射曲安奈德(intravitrealtriamcin

13、olone，IVTA)治療年齡相關(guān)性黃斑變性(age-relatedmaculardegeneration，AMD)中心凹下脈絡(luò)膜新生血管膜(choroidalneovascularisation，CNV)的安全性和有效性。 [方法]采用前瞻性非隨機(jī)對(duì)照研究方法。實(shí)驗(yàn)組選用24例24眼年齡相關(guān)性黃斑變性中心凹下脈絡(luò)膜新生血管膜患者行光動(dòng)力療法聯(lián)合玻璃體腔注射曲安奈德治療。對(duì)照組選用病程、年齡、性別、晶狀體透明度、CNV大小、CN

14、V類型、LogMAR最佳矯正視力(best-correctedvisualacuity，BCVA)和眼內(nèi)壓(intraocularpressure，IOP)與實(shí)驗(yàn)組配對(duì)的年齡相關(guān)性黃斑變性中心凹下脈絡(luò)膜新生血管膜患者，行單純PDT治療，共24例。所有病例均完成每3月隨訪一次，隨訪1年。主要檢測(cè)指標(biāo)：平均LogMARBCVA，平均BCVA變化行數(shù)，BCVA下降行數(shù)小于3行的患者比例，平均治療次數(shù)和并發(fā)癥。 [結(jié)果]實(shí)驗(yàn)組24例24

15、眼行PDT聯(lián)合IVTA治療的患者，治療前平均logMARBCVA為0.88，治療后1年為0.95，治療前后差異無(wú)顯著性意義(P=0.32)。對(duì)照組24例24眼行單純PDT治療的患者，治療前平均logMARBCVA為0.74，治療后1年為1.09，治療前后差異有顯著性意義(P＜0.001)。實(shí)驗(yàn)組平均BCVA下降的行數(shù)顯著低于對(duì)照組，分別下降0.7和3.5行(P=0.015)。BCVA下降行數(shù)小于3行的患者比例，一年后實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組分別為

16、17眼(70.8％)和8眼(33.3％)，兩者差異有顯著性意義(P=0.009)。兩組的平均治療次數(shù)為1.50和1.96次，雖然實(shí)驗(yàn)組的平均治療次數(shù)少于對(duì)照組，但差異無(wú)顯著性意義(P=0.076)。將所有病例按CNV的類型分為典型性CNV和隱匿性CNV兩組，研究結(jié)果顯示PDT聯(lián)合IVTA治療對(duì)防止兩種類型的CNV患者視力下降均有效。PDT聯(lián)合IVTA治療的并發(fā)癥包括：33.33％的患者有短暫的眼內(nèi)壓升高，局部使用抗青光眼滴眼液治療后恢復(fù)