遺傳性無纖維蛋白原血癥表型及病理機制的研究.pdf

1、人纖維蛋白原(fibrinogen，F(xiàn)g)即凝血因子Ⅰ，是血漿中含量最高的凝血因子，也是凝血系統(tǒng)中的一“中心”蛋白質(zhì)。凝血的最后階段是凝血酶形成，使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白。纖維蛋白原除直接參與凝血過程外，還可介導血小板聚集，影響血液粘度，是心、腦血管病發(fā)病的重要危險因素。Fg基因缺陷可導致遺傳性低(或無)纖維蛋白原血癥，以及異常纖維蛋白原血癥。遺傳性凝血因子和抗凝因子缺陷癥為單基因遺傳性疾病，雖然發(fā)生率并不高，但危害性極大，不僅給患者

2、造成終身的痛苦，而且還可遺傳給后代。對先證者相關(guān)基因突變的發(fā)現(xiàn)不但有助于優(yōu)生優(yōu)育，而且也為深入認識相關(guān)凝血因子和抗凝因子蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系提供線索。同時，研究不同的基因突變所引起的臨床表型的差異及其與現(xiàn)有的凝血理論間的矛盾也將有助于完善人們對機體凝血與止血機制的認識。 纖維蛋白原是由Aα、Bβ、γ3條多肽鏈組成的對稱性二聚體，三條鏈分別由3個獨立的基因FGA(M64982)、FGB(M64983)、FGG(M10014)編碼

3、，集中在人類染色體4q28～4q31約50kb的區(qū)域內(nèi)。3條多肽鏈的任何一個基因缺陷均可導致纖維蛋白原的含量或/和功能異常。遺傳性無纖維蛋白原血癥(Afibrinogenemia，MendelianInheritanceinManNo.202400)于1920[1]年首次報道，至今已大約發(fā)現(xiàn)了150例病例，在大多數(shù)病例中呈常染色體隱性遺傳，其中50％發(fā)生在有近親結(jié)婚的家系中。 目的：(1)對一疑為遺傳性無纖維蛋白原血癥的患者及其

4、家系進行臨床診斷、家系調(diào)查及相關(guān)表型研究。(2)對1例遺傳性無纖維蛋白原血癥患者及家系成員的纖維蛋白原三條鏈基因進行序列分析，尋找致病突變，分析遺傳規(guī)律，并對其可能的病理發(fā)病機制進行初步研究。 方法：(1)常規(guī)方法檢測先證者及其家系成員的血常規(guī)、凝血象、vWF含量、血小板聚集功能；用熱沉淀比濁法檢測Fg的蛋白含量；Westernblot檢測先證者及家系成員的血小板α顆粒中Fg及凝血酶敏感蛋白(thrombospondin，TSP

5、)的蛋白水平，血漿Fg三條鏈的含量。(2)酚-氯仿法提取先證者及家系成員基因組DNA，PCR擴增Fg三條鏈基因的所有外顯子及側(cè)翼內(nèi)含子序列，序列分析并進行網(wǎng)上序列比對(BLAST)，尋找其基因突變，并與已報道的相關(guān)文獻及疾病數(shù)據(jù)庫比較，確定是否為新發(fā)突變。(3)對突變引起的后果進行分析，初步闡明其分子發(fā)病機制。 結(jié)果：(1)先證者的凝血象檢查發(fā)現(xiàn)：PT120.1秒，APTT300.1秒，TT180.0秒?；颊叩膙WF水平及血小板

6、計數(shù)均在正常范圍內(nèi)。用Clauss法和熱沉淀比濁法檢測Fg蛋白含量分別為17mg/dL和18mg/dL。WesternBlot分析患者血小板中Fg與血漿中Fg水平平行下降，且?guī)缀鯔z測不到；其父母血小板Fg含量基本正常；而血漿Fg三條鏈輕微減低。患者及父母的ADP誘導血小板聚集率分別為20％，55％和60％。(2)先證者Fg基因共2處突變(按照M64982，M64983和M10014)，F(xiàn)GB基因7969-7972堿基處純合GGGG→GG

7、G以及FGG基因2543堿基處的純合T→A。 結(jié)論：(1)結(jié)合實驗室檢測數(shù)據(jù)和家系調(diào)查結(jié)果，臨床診斷該先證者為遺傳性無纖維蛋白原血癥。(2)患者FGG基因2543堿基處T→A為已報道的多態(tài)位點，形成γ144位氨基酸的I/K(異亮氨酸/賴氨酸)多態(tài)性。FGB基因7969-7972堿基處純合缺失G(GGGG→GGG)，預測將導致β鏈419位氨基酸之后發(fā)生移碼突變，并與435位形成終止密碼子，從而形成缺少β鏈C末端最后27個氨基酸的截