zeste基因增強(qiáng)子同源物2對(duì)胃癌細(xì)胞衰老的影響及調(diào)控機(jī)制.pdf

1、第一部分抑制EZH2表達(dá)對(duì)阿霉素誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞衰老的影響及相關(guān)機(jī)制
　　目的：
　　檢測阿霉素對(duì)胃癌細(xì)胞系的衰老誘導(dǎo)作用，及抑制EZH2表達(dá)對(duì)該作用的影響，并探討相關(guān)機(jī)制。
　　方法：
　　使用阿霉素誘導(dǎo)AGS和MKN28兩種胃癌細(xì)胞系衰老，采用SA-β-gal染色、DAPI染色、流式周期檢測方法檢測衰老誘導(dǎo)效果。觀察siRNA或特異性EZH2抑制劑EGCG聯(lián)合阿霉素的作用對(duì)胃癌細(xì)胞的影響。使用Western-b

2、lot檢測p53/p21通路活化程度。
　　結(jié)果：
　　阿霉素能夠有效誘導(dǎo)AGS和MKN28兩種胃癌細(xì)胞系衰老，從而抑制胃癌細(xì)胞增殖。沉默EZH2能夠促進(jìn)阿霉素對(duì)細(xì)胞的增殖抑制作用，但就其機(jī)制而言，p53野生型與突變型細(xì)胞涉及的機(jī)制不同。對(duì)p53突變型胃癌細(xì)胞MKN28，抑制EZH2在誘導(dǎo)衰老及促進(jìn)凋亡兩方面均與阿霉素存在協(xié)同作用，但對(duì)于 p53野生型胃癌細(xì)胞系A(chǔ)GS無此協(xié)同作用。
　　結(jié)論：
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明阿

3、霉素能夠促進(jìn)胃癌細(xì)胞衰老。并揭示了EZH2與阿霉素聯(lián)合使用對(duì)胃癌細(xì)胞衰老和凋亡進(jìn)程的影響與細(xì)胞p53背景密切相關(guān)。
　　第二部分抑制EZH2表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞系的衰老誘導(dǎo)機(jī)制
　　目的：
　　研究抑制EZH2表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞系MKN28、SGC-7901中INK4/ARF位點(diǎn)的影響，從而探索衰老誘導(dǎo)機(jī)制。
　　方法：
　　采用MTT、細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)及克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測shRNA-EZH2通過抑制EZH2表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞

4、增殖的影響。SA-β-gal染色、流式周期檢測方法檢測細(xì)胞衰老情況。通過Western blot及ChIP驗(yàn)證抑制EZH2表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞系MKN28、SGC-7901中INK4/ARF位點(diǎn)的影響，從而探索衰老誘導(dǎo)機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　shRNA-EZH2能夠有效抑制EZH2及其下游產(chǎn)物H3K27me3的表達(dá)，并能抑制對(duì)胃癌細(xì)胞的增殖及克隆形成能力。對(duì)于 p21、p16均不表達(dá)的 MKN28細(xì)胞系，抑制p15表達(dá)能夠阻礙sh