貴州竹鄉(xiāng)烏骨雞Ghrelin基因的克隆、表達(dá)及生理活性的研究.pdf

1、Ghrelin是生長(zhǎng)素促泌物受體(growthhormonesecretagaguereceptor，GHS-R)的內(nèi)源性配體，是目前為止除了生長(zhǎng)激素釋放激素和生長(zhǎng)抑素外，第三個(gè)調(diào)節(jié)GH分泌的內(nèi)源性物質(zhì)。哺乳類(lèi)的Ghrelin促進(jìn)生長(zhǎng)激素的釋放，提高動(dòng)物的食欲；特別在能量平衡等生理過(guò)程中起重要的調(diào)節(jié)作用，成為近年來(lái)備受關(guān)注的腦腸肽。 目前關(guān)于Ghrelin在禽類(lèi)方面的研究較少，貴州竹鄉(xiāng)烏骨雞Ghrelin與其生長(zhǎng)和攝食調(diào)控等之間

2、的關(guān)系還不清楚。本研究應(yīng)用PCR、RT-PCR等技術(shù)對(duì)Ghrelin基因的結(jié)構(gòu)、原核表達(dá)及生理活性進(jìn)行了研究。在克隆了Ghrelin基因和cDNA的基礎(chǔ)上，成功構(gòu)建了Ghrelin的原核表達(dá)質(zhì)粒，獲得原核表達(dá)菌株ER2566/PTYB11/G，經(jīng)優(yōu)化，該菌株在37℃，OD600=0.5，誘導(dǎo)5小時(shí)的表達(dá)量最高，融合蛋白的表達(dá)量占菌體總蛋白的40％，經(jīng)親和層析純化了融合蛋白。以純化的融合蛋白和人工合成的Ghrelin-KLH為抗原，制備了