促紅細胞生成素對腦白質軟化新生鼠膠質纖維酸性蛋白和神經行為學的影響.pdf

1、研究背景:
　　隨著圍產醫(yī)學及新生兒重癥監(jiān)護技術的發(fā)展，早產兒存活率較前明顯增加，隨之而來的是早產兒腦損傷的發(fā)病率的升高。這一問題已愈來愈受到關注，早產兒腦損傷的發(fā)病機制已成為醫(yī)學界研究的熱點。早產兒腦室周圍白質軟化（periventricular leukomalacia，PVL）是早產兒最常見的腦損傷類型，可引起痙攣性腦性癱瘓、認知及行為學異常等后遺癥。促紅細胞生成素（Erythropoietin，EPO）作為造血因子除了用于

2、早產兒貧血的治療外，在早產兒腦損傷中也具有神經保護作用。故本實驗通過對3日齡SD大鼠單側頸總動脈結扎+缺氧建立PVL模型的基礎上給予EPO進行干預，從病理形態(tài)學、膠質纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）免疫組織化學及遠期神經行為學試驗檢測大鼠的神經運動功能、情感能力和Y-迷宮刺激試驗檢測學習和記憶情況從而探索EPO對PVL新生鼠的神經保護作用。
　　目的:
　　通過對3日齡

3、新生鼠腦室周圍白質軟化模型的建立探討EPO對早產腦白質損傷鼠的神經保護作用，為臨床早期干預早產兒腦白質損傷提供一定的理論依據。
　　方法:
　　150只3日齡（P3）SD大鼠隨機分為對照組和實驗組，實驗組又分為實驗1組（EPO治療組）和實驗2組（PVL組）。對照組僅分離左側頸總動脈，不結扎不缺氧。實驗組大鼠結扎左側頸總動脈，于術后在6％氧氣+94%氮氣混合氣中缺氧2.5小時。實驗1組（EPO治療組）在實驗組基礎上腹腔注射EP

4、O5000 U/kg而實驗2組（PVL組）在實驗組基礎上腹腔注射等量的生理鹽水。分別于術后3d、7d、14d、21d測量體質量后斷頭取腦測量腦重量、腦質量損傷百分比，石蠟包埋切片行常規(guī)HE染色、GFAP免疫組化，剩下的大鼠于生后30d進行神經行為學試驗（懸吊試驗、曠場試驗）和Y-迷宮刺激試驗分別檢測大鼠遠期的神經運動功能、情感能力和學習記憶情況。
　　結果:
　　1.行為學：對照組大鼠術后無明顯行為改變，PVL組和EPO組大

5、鼠缺血缺氧后均出現異常行為學改變，EPO組大鼠主要表現為嗜睡，較易激惹，部分鼠偏向一側爬行或不能翻身，吃奶及活動稍減少，動作不協調，PVL組不僅表現為嗜睡，易激惹，大多數鼠偏向一側爬行或不能翻身，吃奶及活動明顯減少，有的可見全身發(fā)紺，躁動不安，四肢抽動，甚至死亡。
　　2.體質量增長：術后3d、7d及14d PVL組術后體質量增長明顯落后于EPO組和對照組，差異有統計學意義[術后3d：（9.8±0.62）比（11.7±0.80）、

6、（13.8±0.41），術后7d：（12.1±0.46）比（16.1±0.62）、（18.2±0.53），術后14d：（23.5±0.89）比（28.4±0.62）、（33.8±0.71），P均<0.05]；
　　3.腦質量/體質量：術后1d PVL組及EPO組大鼠腦質量/體質量均大于對照組，差異具有統計學意義[（5.37±0.38）、（3.83±0.22）比（2.92±0.32），P<0.01]，術后21d PVL組及 EPO組

7、大鼠腦質量/體質量均小于對照組，差異具有統計學意義[（2.61±0.11）、（2.81±0.07）比（3.70±0.05），P<0.01]；
　　4.腦質量損傷%：PVL組和EPO組各時間點的腦質量損傷%隨著日齡的增加而增大，且術后1d、7d及21d腦質量損傷%均大于對照組，差異具有統計學意義[術后1d：（27.74±7.25）、（13.36±5.40）比（0.29±0.47），術后7d：（37.65±8.12）、（25.32±6

8、.51）比（0.37±0.17），術后21d：（40.95±11.34）、（34.38±10.37）比（0.18±0.08），P均<0.05]；
　　5.HE染色：HE染色示術后7d對照組結構正常，皮質下白質及胼胝體神經纖維束形態(tài)及走向清晰，PVL組可見皮質下及胼胝體結構松散，胼胝體神經纖維束紊亂、呈現疏松網狀，EPO治療組皮質下結構基本正常，胼胝體神經纖維束走向較清晰，胼胝體神經纖維束結構基本正常；術后21d對照組側腦室正常，E

9、PO組側腦室三角區(qū)稍微擴大，PVL組側腦室三角區(qū)擴大明顯；
　　6.免疫組織化學：免疫組織化學結果顯示術后3d與對照組、EPO組相比 PVL組GFAP陽性細胞數目出現增多（P<0.05），術后7d與對照組相比EPO組和PVL組GFAP陽性細胞均明顯增多（P<0.05），且PVL組增多更為明顯（P<0.05）；術后14d EPO組與PVL組GFAP陽性細胞數開始回落，但仍多于對照組（P<0.05）， PVL組陽性細胞數仍然比EPO組

10、多（P<0.05），術后21d各組GFAP陽性細胞數基本回落至正常水平；
　　7.神經行為學試驗:神經行為學試驗懸吊試驗中PVL組鼠大部分反應遲鈍，很少有肢體活動，極易從玻璃棒上掉下，PVL組及EPO組大鼠懸吊試驗的分數均低于對照組大鼠，差異有統計學意義[（1.00±0.76）、（2.38±0.91）比（3.87±0.83），P<0.05]，曠場試驗中PVL組鼠大部分行為及其遲緩，穿越方格數很少，分數均低于對照組及EPO組且具有統

11、計學意義[（5.00±1.20）比（7.37±0.92）、（10.12±1.24），P<0.05]；
　　8.Y迷宮試驗:Y迷宮試驗中PVL組及EPO組所需訓練次數較對照組多且有統計學差異[（31.25±2.60）、（25.1±1.89）比（19.63±3.38），P<0.05]，24小時后記憶保持率 PVL組相比 EPO組、對照組低且差異具有統計學意義[（43.0±5.65）比（56.4±9.18）、（75.4±5.51），P<

12、0.05]，以PVL組24小時后記憶保持率最低。
　　結論:
　　1.通過對3日齡SD大鼠行單側頸總動脈結扎+缺氧2.5h可成功構建PVL模型；
　　2.腦白質軟化時GFAP陽性細胞表達增加，且損傷后3d開始出現，7d達高峰期，損傷后21天基本回落至低表達水平；
　　3.EPO能減少腦白質軟化后GFAP陽性細胞的表達，在神經細胞損傷的修復中起到一定的作用；
　　4. EPO能在一定程度上改善腦白質軟化后大鼠