荷瘤動(dòng)物放療自由基“同心圓”效應(yīng)與PMN呼吸爆發(fā)機(jī)制的研究.pdf

1、腫瘤是嚴(yán)重威脅人類健康的多發(fā)病和常見(jiàn)病之一，放射治療是治療惡性腫瘤的一種重要手段。放療的主要機(jī)制是通過(guò)放射線對(duì)腫瘤的電離作用，直接或間接誘發(fā)自由基、活性氧來(lái)殺傷腫瘤細(xì)胞。但是，放射治療過(guò)程中產(chǎn)生的活性氧在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)也對(duì)正常細(xì)胞有較大的損傷，由此引起的副作用嚴(yán)重制約了放療的正常進(jìn)行，而由中性粒細(xì)胞參與的炎癥反應(yīng)正是放療副作用主要并發(fā)癥—感染和出血發(fā)生的重要環(huán)節(jié)。 本課題的目的是通過(guò)檢測(cè)荷瘤動(dòng)物局部短期照射和長(zhǎng)期照射期后中性

2、粒細(xì)胞呼吸爆發(fā)及其相關(guān)炎癥因子的變化，初步探討放療引發(fā)的中性粒細(xì)胞呼吸爆發(fā)的機(jī)制，同時(shí)應(yīng)用腫瘤放療與放療副作用的“同心圓”效應(yīng)，篩選有效的復(fù)合抗氧化劑，用于放療副作用的治療中，并觀測(cè)其氧化損傷指標(biāo)的變化。從而進(jìn)一步探討抗氧化劑能否在保證放療療效的同時(shí)，適度減輕放射治療引起的炎癥反應(yīng)，及其可能的作用機(jī)制和作用靶點(diǎn)。 本研究中模擬臨床上的腫瘤放療方法，以荷瘤動(dòng)物模型作為研究對(duì)象，進(jìn)行設(shè)計(jì)分組，分為陰性對(duì)照組、模型對(duì)照組、單純照射組和

3、照射給藥組。對(duì)荷瘤大鼠進(jìn)行60Co-γ射線短期和長(zhǎng)期局部照射，觀察各組動(dòng)物的存活情況，然后取各實(shí)驗(yàn)組荷瘤大鼠全血及臟器，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)大鼠中性粒細(xì)胞呼吸爆發(fā)，免疫學(xué)方法及生化方法檢測(cè)不同處理的荷瘤大鼠炎癥因子和蛋白的改變，同時(shí)觀察復(fù)合抗氧化劑的防護(hù)作用。 本研究的體外實(shí)驗(yàn)利用微粒體脂質(zhì)過(guò)氧化模型篩選有效的抗氧化劑。通過(guò)大鼠微粒體的提取，制備了微粒體NADPH-ADP/Fe2+、過(guò)氧異丙苯(cumenehydroperoxide，

4、CHP)、Vc/Fe2+、和四氯化碳(CCL4)脂質(zhì)過(guò)氧化損傷模型，檢測(cè)多種中藥提取物以不同濃度干預(yù)后對(duì)丙二醛含量變化的影響及其劑量效應(yīng)關(guān)系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：紅景天醇提物在四種脂質(zhì)過(guò)氧化(lipidperoxidation，LPO)模型中對(duì)丙二醛的生成均有很強(qiáng)的抑制作用(P＜0.01)，其最大耗氧量抑制率達(dá)到76％；紅景天水提物在NADPH-ADP/Fe2+，Vc/Fe2+和CCL4模型中對(duì)丙二醛的生成均有較強(qiáng)的抑制作用(P＜0.05)，

5、而在CHP模型中的作用不明顯，其最大耗氧量抑制率達(dá)到43.07％；葛根水提物在四種LPO模型中，對(duì)丙二醛的生成均有較強(qiáng)的抑制作用(P＜0.05)，其最大耗氧量抑制率達(dá)到75.09％；川芎、瓜蔞仁水提物在CHP、VC/Fe2+和CCl4/NADP模型中，對(duì)MDA的生成都有顯著的抑制作用(P＜0.05)，瓜蔞仁提取物在CHP模型中只有兩個(gè)高劑量組對(duì)MDA的生成有抑制作用，在VC/Fe2+和CCl4/NADP模型中，各個(gè)劑量組對(duì)MDA的生成均

6、有抑制作用(P＜0.05)。 本研究的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)觀察了荷瘤大鼠60Co-γ射線局部照射后中性粒細(xì)胞呼吸爆發(fā)及其相關(guān)炎癥因子的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：照射前，模型組體重增重明顯高于陰性對(duì)照組(P＜0.05)；照射期間，照射組的體重增重明顯低于模型組(P＜0.05)；長(zhǎng)期照射后，單純照射組荷瘤大鼠中性粒細(xì)胞呼吸爆發(fā)顯著高于其他各組(P＜0.05)；短期照射后，單純照射組大鼠血清中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(neutrophilelastase，N

7、E)、髓過(guò)氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)、總一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase，NOS)、IL-8、丙二醛(malondialdehyde，MDA)的含量均顯著高于陰性對(duì)照組，長(zhǎng)期治療后，照射給藥組大鼠血清NE、MPO、NOS、MDA含量顯著低于單純照射組；短期照射后，單純照射組大鼠血清溶菌酶(lysozyme，LZM)含量顯著低于其它三組(P＜0.01)，長(zhǎng)期照射后單純照射組大鼠血清LZM含量仍顯

8、著低于陰性對(duì)照組(P＜0.05)，照射給藥組與陰性對(duì)照組之間無(wú)明顯差異；在荷瘤動(dòng)物照射后，NF-κB的p65亞基在胞漿中的表達(dá)增多，但是僅在模型組中的腎小球中發(fā)現(xiàn)有核轉(zhuǎn)位。 本研究結(jié)果提示：微粒體LPO模型是可靠的篩選高效復(fù)合抗氧化劑的技術(shù)平臺(tái)，多種中藥此由平臺(tái)檢測(cè)的證實(shí)具有較強(qiáng)的抗氧化作用，并在一定劑量范圍內(nèi)呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)關(guān)系；長(zhǎng)期大劑量放射治療可引發(fā)中性粒細(xì)胞參與的呼吸爆發(fā)，具體作用機(jī)制可能與NE、MPO的增多相關(guān)；復(fù)合抗氧