微波輔助介導(dǎo)的大鼠肝臟靶向基因轉(zhuǎn)染的實驗研究.pdf

1、分類號：R73058密級：學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位匭專業(yè)學(xué)位口學(xué)校代碼：10062學(xué)號：2011602236學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)又坪眚科鼻普T豺嘲N鞭翰鶼滿k麓聃隰飄囂翔胃碩士學(xué)位論文MASTER’SDISSERTATlON論文題目：微波輔助介導(dǎo)的大鼠肝臟靶向基因轉(zhuǎn)染的實驗研究TITLERatLiverTargetingofMicrowaveAssistedMediatedGeneTransfectionExperimentResearch一級學(xué)科

2、：臨床醫(yī)學(xué)二級學(xué)科：外科學(xué)普外日7I’論文作者：孟令凱指導(dǎo)教師：章志翔教授導(dǎo)師組成員：何向輝教授梁曉宇教授天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一四年五月天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要研究目的研究不同微波消融功率消融后肝臟損傷區(qū)域的變化和范圍，對大鼠肝臟消融靶向區(qū)域進行基因轉(zhuǎn)染，觀察基因轉(zhuǎn)染效果。分析熱損傷導(dǎo)致的肝臟的變化，探討熱損傷可能促進基因轉(zhuǎn)染的機制，為熱損傷聯(lián)合基因治療為基礎(chǔ)的肝臟腫瘤基因治療提供實驗基礎(chǔ)。研究方法本實驗首先通過開腹后微波消

3、融大鼠肝臟，消融區(qū)域分為針道炭化區(qū)、凝固壞死區(qū)、炎性反應(yīng)區(qū)和正常肝組織區(qū)。為證明熱損傷導(dǎo)致的炎性反應(yīng)區(qū)(靶向區(qū)域)細胞膜選透性的改變利于實現(xiàn)基因轉(zhuǎn)染的推斷，通過不同功率的消融及相應(yīng)消融區(qū)域的細胞生理功能及形態(tài)的變化范圍大小可以選定特定功率和相應(yīng)功率下炎性反應(yīng)區(qū)的范圍。微波消融建立特定功率下的大鼠肝臟消融模型。根據(jù)相關(guān)文獻實驗動物消融所用功率選定功率分別為20W、25W和30W，消融時間設(shè)置為60S。消融結(jié)束后關(guān)腹，分別在術(shù)后第一、三、五

4、、七天處死大鼠，取肝臟消融標(biāo)本，沿消融針道及垂直針道的方向利用特定直徑為2mm的模具取肝臟標(biāo)本，行HE染色，確定兩個方向上靶向區(qū)的范圍。進一步在消融針道橫徑及縱徑方向行肝臟靶向區(qū)域局部注射及門靜脈高壓注射表達綠色熒光蛋白(GFP)的目的質(zhì)粒和海腎熒光素酶質(zhì)粒于已建模的大鼠肝臟，分別進行體內(nèi)轉(zhuǎn)染。采用冰凍切片技術(shù)，利用倒置熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白表達，通過全波長多功能酶標(biāo)儀測定質(zhì)粒的表達程度；并通過全波長多功能酶標(biāo)儀聯(lián)合海腎熒光素酶質(zhì)粒

5、試劑盒測定質(zhì)粒的表達程度，評估轉(zhuǎn)染情況與目的基因的表達效率。研究結(jié)果1通過設(shè)定微波三個不同功率消融大鼠肝臟，取各區(qū)域的消融肝臟標(biāo)本后通過HE染色可以確定消融后第一天及第三天的炎性反應(yīng)區(qū)(靶向區(qū))的范圍。最終確定消融后第一天在橫徑方向上30W、25W、20W不同功率形成靶向區(qū)的范圍為(0892_1：0097，11830113)cm、(05830052，07830068)cm、(05670082，077540076)cm；在縱徑方向上為(0