高效液相色譜-熒光法同時(shí)測定重性抑郁障礙患者血清酪氨酸、5羥色胺和色胺酸.pdf

1、目的：⑴建立一種簡單、快速并能同時(shí)測定血清中酪氨酸(Tyr)、5-羥色胺(5-HT)和色氨酸(Trp)的高效液相色譜-熒光檢測法(HPLC-FLD)。⑵探討血清酪氨酸(Tyr)、5-羥色N(5-HT)和色氨酸(Trp)含量測定在重性抑郁障礙(MDD)患者中的臨床價(jià)值。
　　 方法：①血清標(biāo)本與等量5％(V/V)高氯酸溶液混合處理去蛋白后離心取上清液20μL直接進(jìn)樣分析。用Atlantis C18 column(4.6×150mm

2、，i.d.5μm)分離；流動(dòng)相為0.1mol/L KH2PO4：甲醇(85:15，V/V)；流速1.0mL/min；熒光檢測波長：0-4min激發(fā)光波長228nm，發(fā)射光波長為306nm；4-7.5min激發(fā)光波長278nm，發(fā)射光波長為338nm；7.5min后激發(fā)光波長285nm，發(fā)射光波長為353nm。室溫下12min內(nèi)完成分析測定。Tyr、5-HT和Trp均采用峰保留值比較法和疊加法進(jìn)行定性分析，用外標(biāo)法測定峰面積進(jìn)行定量分析。

3、通過對線性范圍和檢測限、精密度、回收率和干擾試驗(yàn)的考察，對該方法進(jìn)行方法學(xué)評價(jià)。②測定健康成人(n=110例)和MDD患者(n=60例)血清Tyr、5-HT和Trp含量。探討MDD患者血清Tyr、5-HT和Trp含量含量變化臨床意義。
　　 結(jié)果：⑴血清和標(biāo)準(zhǔn)品樣本的Tyr、5-HT和Trp峰均分離良好，保留時(shí)間分別約為3min、5min和9min。Tyr的線性范圍為0.55-275μmol/L，最低檢出濃度為0.014μmol

4、/L，回收率為98.0％-103.3％；5-HT的線性范圍為0.094-47.03μmol/L，最低檢出濃度為0.024μmol/L，回收率為96.3％-103.1％；Trp的線性范圍為0.049-49μmol/L，最低檢測濃度為0.0049μmol/L，回收率為93.3％-103.5％。Tyr、5-HT和Trp的日內(nèi)、日間測定的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于5％。苯丙氨酸(Phe)、犬尿喹啉酸(Kyna)、犬尿氨酸(Kyn)和肌酐(Cre)等物質(zhì)

5、對該法均無干擾。⑵110例健康成人血清Tyr含量為(63.68±2.23)μmol/L，血清5-HT含量為(1.15±0.04)μmol/L，血清Trp含量為(42.46±1.17)±μmol/L，5-HT/Trp(×10-5)比值為(26.20±7.21)。與正常對照組比較，MDD患者組血清Tyr、5-HT和Trp含量顯著降低(P<0.01)。Tyr診斷MDD的敏感性和特異性分別為：85.0％和100.0％；5-HT/Trp比值診斷M