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文檔簡(jiǎn)介
1、油松毛蟲(chóng)(Dendrolimus fabulaeformis Tsai et Liu)和日本龜蠟蚧(Ceroplastesjaponicus Green)是農(nóng)林業(yè)的重大害蟲(chóng),傳統(tǒng)的化學(xué)防治手段存在農(nóng)藥殘留,環(huán)境污染,殺傷天敵和害蟲(chóng)產(chǎn)生抗藥性等問(wèn)題。采用病原菌進(jìn)行生物防治具有沒(méi)有污染、防治靶標(biāo)害蟲(chóng)專一性強(qiáng)和致死效果好等優(yōu)點(diǎn),然而病原菌在侵染昆蟲(chóng)的過(guò)程中會(huì)受到昆蟲(chóng)免疫系統(tǒng)的抵抗,因此,研究昆蟲(chóng)感染病原菌后的免疫反應(yīng)能對(duì)應(yīng)用病原菌防治害蟲(chóng)提供
2、理論依據(jù)。本論文研究了油松毛蟲(chóng)和日本龜蠟蚧受病原菌入侵后的免疫反應(yīng),其內(nèi)容包括兩部分。
1.油松毛蟲(chóng)抗菌物質(zhì)及其抗菌活性的研究采用體內(nèi)注射法,對(duì)油松毛蟲(chóng)Dendrolimus tabulaeformis3齡幼蟲(chóng)注射濃度為1.0×108個(gè)/mL的大腸桿菌Escherichia coli菌懸液,使其誘導(dǎo)產(chǎn)生抗菌物質(zhì),12h后收集制備血淋巴粗提液。分別測(cè)定對(duì)4種細(xì)菌和4種真菌的抗菌活性,并檢測(cè)溫度、pH值變化和反復(fù)凍融對(duì)抗菌活性的影
3、響。采用Tricine-SDS-PAGE電泳法確定抗菌物質(zhì)的分子量大小。結(jié)果發(fā)現(xiàn),誘導(dǎo)后的油松毛蟲(chóng)3齡幼蟲(chóng)血淋巴粗提液對(duì)試驗(yàn)的細(xì)菌和真菌均有不同程度的抑制作用,其中對(duì)革蘭氏陰性細(xì)菌大腸桿菌(Escherichicha coli)和變形桿菌(Proteus species)的抑制作用強(qiáng)于革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)。血淋巴粗提液的的抗菌活性在
4、50℃水浴和pH值在4-9的條件下保持穩(wěn)定,反復(fù)凍融1-5次其抗菌物質(zhì)的活性僅降低4.3-14.9%。電泳結(jié)果顯示,誘導(dǎo)組血淋巴提粗液在23.2KDa和15.0KDa處分別出現(xiàn)一條特異性條帶,在60.4KDa處蛋白帶變淺。由此推測(cè)從油松毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)可能是分子量為23.2KDa和15.0KDa的抗菌肽或者抗菌蛋白。
2.日本龜蠟蚧對(duì)蠟蚧輪枝菌感染的免疫反應(yīng)研究研究了蚧蟲(chóng)病原真菌蠟蚧輪枝菌的生物學(xué)特性,結(jié)果表明溫
5、度和濕度對(duì)蠟蚧輪枝菌孢子的萌發(fā),菌絲的生長(zhǎng)和發(fā)育有明顯的影響。蠟蚧輪枝菌孢子萌發(fā)、生長(zhǎng)和產(chǎn)孢的適宜條件為:相對(duì)濕度95%、溫度為25℃。蠟蚧輪枝菌菌株菌絲生長(zhǎng)的適溫范圍是20-30℃。產(chǎn)孢量為是4.31×106-4.57×108個(gè)/mL。
在溫度為25±1℃,相對(duì)濕度95±5%的條件下用不同濃度的孢子懸液感染日本龜蠟蚧,相同感染時(shí)間下,孢子濃度與蟲(chóng)體死亡率呈正相關(guān),侵染死亡率最高為91.2%。初步觀察了蠟蚧輪枝菌感染日本龜蠟蚧
6、的入侵特點(diǎn)以及日本龜蠟蚧染菌后的罹病癥狀,發(fā)現(xiàn)在陰門區(qū)菌絲較多,蟲(chóng)體邊緣與蠟殼之間有分離的縫隙出現(xiàn),內(nèi)部器官和組織嚴(yán)重萎縮、黑化,蠟殼顏色也呈現(xiàn)污濁狀。
采用分光光度法測(cè)定了日本龜蠟蚧被蠟蚧輪枝菌感染后保護(hù)酶和抗菌物質(zhì)的活性,結(jié)果表明:被蠟蚧輪枝菌感染后第1-8d,感染蟲(chóng)體內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)的活性顯著高于未感染的蟲(chóng)體,并呈現(xiàn)出先升高后下降的變化趨勢(shì),而未感染蟲(chóng)體的變化不大;過(guò)氧化氫酶(CAT)及多酚氧化酶(PPO)的活
7、性變化趨勢(shì)與SOD的相似。利用聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù),分析了日本龜蠟蚧感染蠟蚧輪枝菌后1-8d體內(nèi)SOD同工酶與CAT同工酶的變化,發(fā)現(xiàn)SOD和CAT同工酶帶寬與酶帶亮暗均變化顯著。
測(cè)定了日本龜蠟蚧被蠟蚧輪枝菌感染后體內(nèi)蛋白質(zhì)含量和血淋巴抗菌物質(zhì)的變化。結(jié)果表明:被蠟蚧輪枝菌感染后1-8d,蟲(chóng)體內(nèi)總蛋白質(zhì)和含量逐漸減少,而未感染的則變化不大;染菌后第2d,日本龜蠟蚧血淋巴內(nèi)新產(chǎn)生了分子量為16.8KDa的蛋白質(zhì),說(shuō)明蠟蚧輪枝
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