丙酮酸乙酯對(duì)腦外傷后大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、[研究目的]腦外傷是青年人的主要死亡和致殘?jiān)颍梢杂|發(fā)包括氧化應(yīng)激和炎癥在內(nèi)的一系列級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而導(dǎo)致繼發(fā)性腦損傷和長(zhǎng)期神經(jīng)功能障礙，然而目前臨床上尚無(wú)有效的治療方法能夠減輕患者的神經(jīng)功能障礙，降低殘疾的發(fā)生率。越來(lái)越多的研究提示，抗氧化劑丙酮酸乙酯對(duì)急性腦損傷具有神經(jīng)保護(hù)作用，機(jī)制尚未完全闡明。本研究將在大鼠腦外傷模型中研究丙酮酸乙酯的長(zhǎng)期神經(jīng)保護(hù)作用及其可能的作用機(jī)制。
　　[研究方法]將成年SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、對(duì)照

2、組和丙酮酸乙酯處理組，進(jìn)行單側(cè)大腦皮層挫傷手術(shù)。首先，我們建立大鼠腦外傷模型，并通過(guò)一系列行為學(xué)測(cè)試（包括錯(cuò)步試驗(yàn)、Morris水迷宮）和焦油紫染色損傷體積分析來(lái)確定丙酮酸乙酯的有效劑量和治療時(shí)間窗。隨后，我們?cè)谀X外傷后48小時(shí)向大鼠股靜脈內(nèi)注射evans blue活性染料以確認(rèn)血腦屏障完整性的破壞程度;通過(guò)透射電鏡來(lái)觀察各組大鼠血腦屏障超微結(jié)構(gòu)的變化;并采用免疫組化、明膠酶譜、western blots和實(shí)時(shí)定量real-time P

3、CR等方法來(lái)評(píng)估各組大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞的激活情況和多種炎癥介質(zhì)的mRNA水平，以及基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP-9和MMP-2）的蛋白表達(dá)和活性改變。最后，我們通過(guò)免疫組化和透射電鏡在體觀察腦外傷后大鼠軸突、髓鞘和少突膠質(zhì)細(xì)胞祖細(xì)胞的形態(tài)分布和數(shù)量改變，并在體外進(jìn)行大鼠原代少突膠質(zhì)細(xì)胞祖細(xì)胞培養(yǎng)，以進(jìn)一步探索丙酮酸乙酯對(duì)少突膠質(zhì)細(xì)胞祖細(xì)胞的保護(hù)機(jī)制。
　　[結(jié)果]我們成功建立了大鼠腦外傷模型，發(fā)現(xiàn)在腦外傷后即刻、12、24、36、48、60

4、小時(shí)，分別向大鼠腹腔內(nèi)注射丙酮酸乙酯30mg/kg可以觀察到顯著的神經(jīng)保護(hù)作用，即促進(jìn)腦外傷后28天大鼠的感覺(jué)運(yùn)動(dòng)功能和空間學(xué)習(xí)記憶能力的恢復(fù)，并能有效減少組織損傷體積。我們發(fā)現(xiàn)丙酮酸乙酯可以減少腦外傷后大鼠血腦屏障的滲漏，抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的過(guò)度激活，降低多種炎癥介質(zhì)(TNF-α，IL-1α，IL-1β，COX-2和iNOS)的mRNA水平，并減少外傷誘導(dǎo)的MMP-9和MMP-2的蛋白表達(dá)和活性上調(diào)。最后，我們通過(guò)在體和離體研究發(fā)現(xiàn)丙酮酸