血液系統(tǒng)疾病中LRP15基因甲基化狀態(tài)的研究.pdf

1、為了準(zhǔn)確了解DNA甲基化與細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的關(guān)系,有必要詳細(xì)了解腫瘤DNA中特定序列的甲基化改變.LRP15基因是該室獲得的一段急性白血病復(fù)發(fā)病人中NotI酶切位點(diǎn)甲基化的27kbp DNA序列.生物信息學(xué)分析表明,它是一個與人類急性白血病及其他腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的基因.為進(jìn)一步從實(shí)驗(yàn)上證實(shí)該基因修飾水平的變化是否與白血病的發(fā)生發(fā)展相關(guān),我們選擇NPBSC、原代白血病細(xì)胞及正常細(xì)胞系、白血病細(xì)胞系作為研究對象,采用MS-PCR方法分別檢

2、測了LRP15基因的甲基化狀況,結(jié)果顯示COS7、K562、HL60細(xì)胞系及良性血液病、白血病、MDS標(biāo)本中均未檢測到LRP15基因的缺失;LRP15基因修飾水平的變化與惡性腫瘤有關(guān),而與正常細(xì)胞的成熟幼稚與否無關(guān);LRP15基因在AL中甲基化陽性率明顯高于NPBSC,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.000<0.05),表明LRP15基因甲基化與急性白血病有關(guān);急性白血病的LRP15基因甲基化陽性率明顯高于慢性白血病,x<'2>檢驗(yàn)二者差異有

3、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其中8例CML患者LRP15基因均無陽性,而1例CML急變期患者LRP15基因甲基化呈陽性,提示LRP15基因甲基化可能對CML病情的發(fā)展和急性白血病的發(fā)生有意義;AL不同分型中LRP15基因甲基化陽性率無明顯差異.除了LRP15基因在惡性腫瘤中的甲基化狀況,我們還研究了其在非惡性血液病患者骨髓中的甲基化狀況,MS-PCR結(jié)果表明LRP15基因在非惡性血液病患者骨髓中的甲基化陽性率為55.56%(5/9),與健康供者相比差異

4、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,表明LRP15基因甲基化不但與惡性腫瘤有關(guān),與血液系統(tǒng)良性疾病也有一定關(guān)系.其中甲基化陽性的患者中4例與免疫系統(tǒng)疾病有關(guān),初步提示LRP15基因甲基化可能對免疫系統(tǒng)疾病也有一定意義.為了進(jìn)一步驗(yàn)證MS-PCR檢測LRP15基因甲基化的準(zhǔn)確性,排除污染的可能性,我們采用COBRA特異性引物,PCR擴(kuò)增1例MS-PCR檢測為甲基化、非甲基化雙陽性的良性血液病(ITP)樣本,得到257bp大小的目的片斷,BstuI酶切鑒定,測序