“宣參1號”及其脫毒組培株的質(zhì)量評價研究.pdf

1、太子參為石竹科(Caryophyllaceae)異葉假繁縷屬植物Pseudostellaria heteroph-ylla(Miq.) Pax的干燥塊根，具有補益脾肺，益氣生津的作用。現(xiàn)代藥理研究表明，太子參具有增強免疫、抗氧化、抗衰老、抗菌、抗病毒及清除自由基等作用。由于太子參野生資源日漸減少，市場需求量卻逐年增加，現(xiàn)市場上多為栽培品種。“宣參1號”為安徽省宣州市選育的優(yōu)良太子參新品種，在生產(chǎn)上極具競爭力，但由于“宣參1號”屬高不育型

2、品種，病毒病發(fā)生嚴重，原有的優(yōu)良性狀減退。課題組前期運用植物細胞無融合技術(shù)改善太子參內(nèi)在品質(zhì)，培育出了“宣參1號”的脫毒組培苗株。本論文采用現(xiàn)代分析技術(shù)方法從有效成分的提取工藝及含量測定、HPLC-ESI-MSn指紋圖譜和聚類分析方面對“宣參1號”、“宣參1號”的脫毒組培株進行質(zhì)量評價研究。同時運用藥理學(xué)研究方法比較了“宣參1號”、“宣參1號”的脫毒組培株對脾虛小鼠免疫功能的影響。為太子參藥材質(zhì)量的綜合評價和宣州太子參GAP實施提供科學(xué)

3、依據(jù)。主要研究內(nèi)容與主要結(jié)論:
　　1.太子參多糖及總皂苷的提取工藝研究。采用正交設(shè)計優(yōu)化了太子參多糖和皂苷的提取工藝。結(jié)果表明，太子參多糖的最佳提取工藝為:提取溫度為90℃，料液比為1∶25，提取時間為3h，回流提取2次。太子參皂苷的最佳提取工藝為:乙醇濃度為70％，乙醇用量為8倍量，提取次數(shù)為3次，提取時間為2h。通過驗證實驗證明，多糖和皂苷的提取工藝合理可行。
　　2.“宣參1號”及其脫毒組培株與不同產(chǎn)地太子參有效成分

4、的測定。分別采用紫外分光光度法和高效液相色譜法測定了17個樣品的多糖、皂苷和太子參環(huán)肽A、B的含量。通過實驗結(jié)果及分析可以得到17個太子參樣品中太子參環(huán)肽A、B含量以“宣參1號”脫毒株含量最高為0.0039％、0.030％。太子參總皂苷含量以“宣參1號”脫毒株最高為1.231％，其次是福建柘榮和“宣參1號”分別為0.754％、0.735％，安徽銅陵樣品最低為0.323％。各地太子參樣品多糖含量均高于5％，其中“宣參1號”脫毒株的多糖含量

5、為9.30％比“宣參1號”8.31％高。綜合這幾類成分含量結(jié)果分析我們發(fā)現(xiàn)“宣參1號”脫毒株的藥材品質(zhì)比“宣參1號”優(yōu)良，而且同時將兩者的有效成分含量與其他不同產(chǎn)地的太子參比較，“宣參1號”通過植物細胞組織培養(yǎng)技術(shù)得到的脫毒株的品質(zhì)具有顯著優(yōu)勢。
　　3.太子參HPLC-ESI-MSn指紋圖譜研究及聚類分析。采用高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)初步建立了17個不同產(chǎn)地太子參樣品的10個共有峰的太子參指紋圖譜，同時對這10個特征峰的化學(xué)成

6、分進行了成分定性歸屬，初步鑒定了8個特征性化學(xué)成分，分別是芹菜素-6-C-葡萄糖-8-C邛可拉伯糖苷、Pseudostellarin B、Pseudostellarin A、Heterophyllin B、Heterophyllin A、Pseudostellarin G、Pseudostellarin E。然后運用SPSS軟件對17個不同樣品進行指紋圖譜的聚類分析，這17個樣品聚成三類。江蘇、安徽、貴州三個產(chǎn)地的樣品聚為一類，福建柘榮

7、聚為一類，“宣參1號”脫毒株分為一類，其原因可能是脫毒植物組織培養(yǎng)后優(yōu)良性狀得到突顯使得各類化學(xué)成分含量發(fā)生了較大變化。
　　4.“宣參1號”及其脫毒組培株與不同產(chǎn)地太子參對脾虛證小鼠免疫功能的影響。采用大黃苦寒瀉下的作用建立小鼠的脾虛癥模型，通過小鼠免疫器官指數(shù)及血象指標的比較評價不同產(chǎn)地太子參質(zhì)量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，造模后給藥組小鼠的體重指數(shù)、脾臟指數(shù)及胸腺指數(shù)都顯著升高，血象的各項指標均有所恢復(fù)。由此可見，“宣參1號”、“宣參1號”