APPK724M新發(fā)突變導(dǎo)致中國(guó)家庭早發(fā)型阿爾茨海默病研究.pdf

1、目的:阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是老年人群常見(jiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。盡管中國(guó)擁有全世界數(shù)量最多的老年人口和癡呆人群，國(guó)內(nèi)鮮有關(guān)于家族性AD基因突變的報(bào)道。我們?cè)谇捌诠ぷ髦邪l(fā)現(xiàn)了一個(gè)早發(fā)型家族性AD(early-onset familial AD，EOFAD)家系攜帶有新的APP基因突變:APPK724M。為了證實(shí)該EOFAD的致病基因及其機(jī)制，本研究對(duì)該家系成員三個(gè)AD致病基因的突變位點(diǎn)及風(fēng)險(xiǎn)因子A

2、POE等進(jìn)行了全面、系統(tǒng)分析，并對(duì)該家系A(chǔ)PPK724M基因突變的致病機(jī)理進(jìn)行了探討。
　　方法:收集AD患者及其直系親屬和無(wú)關(guān)人群對(duì)照組外周血DNA樣本，針對(duì)PSEN-1和PSEN-2基因的編碼外顯子和APP外顯子16、17設(shè)計(jì)引物，PCR擴(kuò)增基因外顯子后進(jìn)行DNA測(cè)序和序列分析;針對(duì)APOE基因編碼外顯子設(shè)計(jì)引物,PCR擴(kuò)增基因外顯子后測(cè)序鑒定APOE基因型。同時(shí)，構(gòu)建APPK724M突變基因真核表達(dá)載體，使用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染HE

3、K293細(xì)胞，Western Blot、ELISA檢測(cè)APP表達(dá)和代謝情況。
　　結(jié)果:臨床樣本AD致病基因的測(cè)序結(jié)果表明，該家系中接受檢測(cè)的癡呆癥患者皆攜帶APPK724M突變，而PSEN1/2基因未見(jiàn)編碼突變，已檢測(cè)的該家系的健康個(gè)體及對(duì)照組成員標(biāo)本均未見(jiàn)相應(yīng)的APP基因突變。先證者APOE基因型為3/4，而其他成員皆為3/3。Western Blot結(jié)果顯示野生型與突變型APP表達(dá)水平接近;ELISA結(jié)果顯示，與野生型APP