肺癌miRNA高能量測序的初步研究.pdf

1、肺癌是全世界范圍內(nèi)由癌癥引起死亡最主要的因素。非小細(xì)胞肺癌作為肺癌的一大類型，主要包含鱗癌和腺癌兩種。近年來有關(guān)肺癌生物標(biāo)記物的研究變得越來越熱門，生物標(biāo)記物的表征為肺癌的發(fā)病機(jī)理及發(fā)生發(fā)展過程的研究提供了一種新的途徑。MicroRNA(miRNA)就是其中一種生物標(biāo)記物，miRNA是一類小的非編碼RNA，其通過與靶mRNA的互補(bǔ)配對來實(shí)現(xiàn)對基因的表達(dá)調(diào)控。近年來大量研究表明miRNA的表達(dá)調(diào)控與肺癌等多種癌癥的形成發(fā)展有一定聯(lián)系。Mi

2、RNA的檢測方法獲得了空前的發(fā)展，而高通量測序技術(shù)在miRNA檢測方法中有其數(shù)據(jù)量大等優(yōu)勢，并且能發(fā)現(xiàn)一些新的miRNA。但是利用高通量測序技術(shù)全面表征肺鱗癌和腺癌中miRNA的表達(dá)差異，尤其是同時(shí)研究肺癌患者的癌組織、癌旁組織及正常組織中miRNA的表達(dá)情況還鮮有報(bào)道。
　　基于上述背景和問題我們對肺鱗癌和腺癌各自的正常、癌旁及癌三種不同組織中miRNA進(jìn)行文庫制備，然后通過高通量測序技術(shù)同時(shí)對miRNA種類及表達(dá)水平進(jìn)行檢測。

3、經(jīng)數(shù)據(jù)處理分析后利用定量PCR技術(shù)對差異性表達(dá)的miRNA進(jìn)行定量驗(yàn)證，最后對經(jīng)驗(yàn)證的差異性表達(dá)的miRNA進(jìn)行相關(guān)靶基因預(yù)測及功能分析。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:
　　1、肺鱗癌和腺癌的癌組織樣本間差異性表達(dá)的miRNA:在鱗癌的癌、癌旁和正常組織中分別發(fā)現(xiàn)368、306和231中miRNA，在腺癌的癌、癌旁和正常組織中分別發(fā)現(xiàn)259、401和389種miRNA。分析結(jié)果表明鱗癌和腺癌的癌組織間存在多種差異表達(dá)的miRNA，其中m

4、iR-19a-3p、miR-200b-3p和miR-138-5p的差異表達(dá)最為顯著，miR-19a-3p和miR-138-5p的表達(dá)水平在定量PCR中得到證實(shí)，這兩種miRNA可能作為區(qū)分肺鱗癌和腺癌的潛在的標(biāo)志性miRNA分子。
　　2、肺鱗癌和腺癌各自的三類組織樣本間具有漸進(jìn)性表達(dá)差異的miRNA:結(jié)果發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)的miRNA中存在一些從正常組織到癌旁組織到癌組織其表達(dá)水平逐漸上調(diào)或下調(diào)的miRNA。其中鱗癌組織中miR-19

5、a-3p和miR-425-5p呈現(xiàn)顯著性地逐漸上調(diào)，而miR-218-5p和miR-34c-5p顯著性逐漸下調(diào)。腺癌組織中miR-21-5p和miR-196a-5p逐漸上調(diào)，而miR-218-5p顯著性地逐漸下調(diào)。其中miR-19a-3p和miR-425-5p兩種miRNA表達(dá)水平的漸進(jìn)性變化在定量PCR分析中得到了證實(shí)。
　　3、差異性表達(dá)miRNA靶基因預(yù)測及功能富集:對經(jīng)定量PCR驗(yàn)證的三種miRNA進(jìn)行相關(guān)靶基因預(yù)測及靶基

6、因功能富集，發(fā)現(xiàn)了miRNA潛在的可能與肺癌相關(guān)的靶基因，并且富集了靶基因調(diào)控的通路和生物學(xué)功能。
　　4、結(jié)論:本研究利用高通量測序技術(shù)檢測肺癌組織中的miRNA，在驗(yàn)證了部分前人研究結(jié)果的基礎(chǔ)上還發(fā)現(xiàn)了一些新的特異性表達(dá)的miRNA。結(jié)果分析獲得了一些在鱗癌與肺癌之間存在顯著性表達(dá)差異的miRNA(miR-19a-3p，miR-138-5p)和一些在正常組織、癌旁組織及癌組織中呈現(xiàn)出漸進(jìn)性變化趨勢的miRNA(miR-19a-