擬南芥BAG基因突變體的表型分析及超表達載體的構建.pdf

1、BAG家族蛋白(Bcl-2-associated anthanogene family proteins)最初是從哺乳動物鑒定到，因能夠與抗凋亡蛋白Bcl2結合并促進細胞生存而得名(Takayama et al．1995)。擬南芥基因組含有8個BAG蛋白，它們編碼的蛋白分子都含有BAG結構域(BAG domain)。根據這些蛋白所含其它保守序列的情況可將擬南芥BAG蛋白家族分為三類：(1)人類BAG1在植物中的直向同源物：AtBAG1，

2、AtBAG2，AtBAG3和AtBAG4，它們都帶有泛素類的結構域；(2)除BAG結構域外，無其它保守序列：AtBAG5；(3)含有鈣調素結合結構域，可能受Ca2+的調控：AtBAG6;AtBAG7和AtBAG8。但這些BAG蛋白在擬南芥體內的功能尚不清楚。 為了探索擬南芥BAG蛋白的功能，我們從TAIR(The Arabidopsis Information Resources)突變體庫鑒定了兩種BAG蛋白基因(AtBAG4和

3、AtBAG7)的純合突變體，并分析了它們的表型變化。發(fā)現這些突變體在正常的生長條件下與野生型(Columbia型)沒有明顯的表型區(qū)別，都能夠正常生長發(fā)育、開花和結實。之后進一步分析了鹽脅迫、氧化脅迫、高溫脅迫、UVB輻射等逆境脅迫對這些突變體的影響。結果顯示突變體對鹽脅迫比野生型敏感，在50 mM的NaCl處理條件下突變體停止生長，逐漸枯萎死亡，但野生型在此條件下卻能夠生存。說明BAG蛋白可能在擬南芥的抗鹽脅迫方面起著重要作用。

4、 在實驗室內所試的氧化脅迫條件下，同樣濃度H2O2處理下的突變體比野生型的葉綠素含量低，表明該基因缺失的突變體增加了對H2O2反應的敏感性。高溫脅迫和UVB輻射條件下初步斷定野生型和突變體擬南芥并無明顯差別。 為了進一步證實BAG蛋白在擬南芥抗鹽脅迫方面的作用，我們構建了超量表達AtBAG4、AtBAG7與綠色熒光蛋白(GFP)融合蛋白的植物表達載體pBI12-GFP-AtBAG7和pBI12-GFP-AtBAG4，轉化擬南芥，