部分預(yù)植肝缺血預(yù)處理對肝再生影響的實驗研究.pdf

1、第一章動物模型的建立及缺血預(yù)處理對大鼠肝大部切除后余肝缺血再灌注損傷保護作用的研究 目的：建立大鼠肝大部切除(70％)模型，肝大部切除后余肝缺血再灌注及缺血預(yù)處理模型，觀察缺血預(yù)處理對大鼠肝大部切除后余肝缺血再灌注損傷的影響，為以后的研究提供基礎(chǔ)。 方法：采用預(yù)先保留門靜脈轉(zhuǎn)流肝葉(約占全肝70％)，阻斷部分肝葉(約占全肝30％)血供，到預(yù)定觀察終點后重新開放血供灌注缺血肝葉，同時切除門靜脈轉(zhuǎn)流肝葉(70％肝葉切除)模型

2、。144只SD(Sprague Daweley)雄性大鼠隨機分為單純肝葉切除組(PH)，缺血再灌注組(IR)，缺血預(yù)處理組(IP)，各組分別于肝葉切除后0、1、3、6、12、24、48、72h取材，應(yīng)用生化分析儀檢測各組血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的變化，并觀察肝組織病理改變。 結(jié)果：(1)在IR組與IP組，隨著缺血后再灌注時間的延長，大鼠血清ALT，AST明顯升高。約在24h時達最高峰，而后漸下降。

3、(2)與單純肝葉切除組比較，給予缺血再灌注損傷后血清ALT，AST明顯升高，在1～72h組差異顯著(p<0.05)。 (3)給予缺血預(yù)處理后，與缺血再灌注組比較，復(fù)灌后血清ALT，AST明顯下降，在1～72h組差異顯著(p<0.05)。 (4)病理檢查：光鏡下缺血再灌注組隨著再灌注時間延長，肝細胞壞死加劇，炎癥細胞浸潤更明顯，約在48h達高峰。與缺血再灌注組比較，缺血預(yù)處理組的肝細胞壞死范圍變小，損傷減輕。而單純肝切除組

4、損傷更輕。 結(jié)論：肝大部切除后余肝缺血再灌注對肝細胞具有損傷作用，而缺血預(yù)處理可減輕這種損傷。 第二章 缺血預(yù)處理對存在缺血再灌注損傷大鼠肝再生的影響 目的：觀察缺血再灌注和缺血預(yù)處理對大鼠肝大部切除后余肝肝再生的影響，探討缺血預(yù)處理對存在缺血再灌注損傷肝肝再生的促進作用。 方法：144只SD雄性大鼠隨機分為單純肝葉切除組(PH)，缺血再灌注組(IR)，缺血預(yù)處理組(IP)，利用肝大部切除(70％)余肝

5、缺血再灌注模型。各組分別于肝葉切除后0、1、3、6、12、24、48、72h取材，應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法對肝組織PCNA進行免疫組化檢測并作半定量分析，觀察其在缺血再灌注損傷和缺血預(yù)處理中的變化，同時稱切取肝濕重計算肝再生度并觀察肝組織病理改變，計算肝細胞核分裂指數(shù)。 結(jié)果： (1)PCNA在肝葉切除后余肝肝組織中的表達逐漸升高，約在24～48h時達最高峰，而后漸下降。與PH組比較，給予缺血再灌注損傷后PCNA的表達在6

6、～72h組明顯減低(p<0.05)。與IR組相比，給予缺血預(yù)處理后PCNA的表達在6～72h組明顯增高(p<0.05)。 (2)各組肝再生度在肝葉切除術(shù)后24h逐漸升高。與PH組比較，IR組在肝葉切除術(shù)后24h、48h、72h肝再生度明顯降低(p<0.05)；與IR組相比，IP組在肝葉切除術(shù)后24h、48h、72h肝再生度明顯升高(p<0.05)。 (3)各組肝細胞核分裂在肝葉切除術(shù)后24h開始逐漸增多，在48h達高峰，

7、而后漸下降。與PH組比較，IR組在肝葉切除術(shù)后24h、48h、72h肝細胞核分裂指數(shù)明顯降低(p<0.05)。與IR組相比，IP組在肝葉切除術(shù)后24h、48h、72h肝細胞核分裂指數(shù)明顯升高(p<0.05)。 結(jié)論：肝大部切除后余肝缺血再灌注對肝再生有明顯抑制作用，而缺血預(yù)處理可減輕這種損傷，促進肝細胞再生。 第三章缺血預(yù)處理對大鼠肝再生TNF-α/IL-6/STAT3通路的影響 目的：探討大鼠肝大部切除術(shù)后余肝

8、缺血再灌注和缺血預(yù)處理對肝細胞再生TNF-α/IL-6/STAT3通路和肝細胞周期的影響。 方法：144只SD雄性大鼠隨機分為單純肝葉切除組(PH)，缺血再灌注組(IR)，缺血預(yù)處理組(IP)，利用肝大部切除(70％)后余肝缺血再灌注和缺血預(yù)處理模型。各組分別于肝葉切除后0、1、3、6、12、24、48、72h取材，應(yīng)用ELISA法檢測各組肝組織中腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白細胞介素

9、-6(Interlukin-6,IL-6)水平，應(yīng)用RT-PCR法檢測各組NF-kB、STAT3、Cyclin D1 mRNA的表達。 結(jié)果：(1)在PH組，TNF-α水平在肝葉切除后急劇升高，1小時達高峰，而后漸下降。與PH組相比，IR組即予缺血再灌注損傷后，肝組織中TNF-a的表達水平在再灌注后1～6小時明顯升高(P<0.05)，而在再灌注損傷后24～72小時其表達水平明顯降低(P<0.05)。予缺血預(yù)處理后，肝組織中TNF

10、-a的表達水平在再灌注后1～6小時較IR組降低(P<0.05)，而在再灌注損傷后24～72小時其表達水平較IR組無明顯變化。 (2)在PH組，IL-6水平在肝葉切除術(shù)后持續(xù)升高，6小時達高峰，而后緩慢下降。與PH組相比，IR組即予缺血再灌注損傷后，肝組織中IL-6的表達水平明顯降低(P<0.05)。予缺血預(yù)處理后，肝組織中IL-6的表達水平較IR組明顯升高(P<0.05)。 (3)在PH組，NF-KB、STAT3 mRN

11、A表達在肝葉切除后均增高，約1～3h達高峰：Cyclin D1mRNA表達在肝葉切除后12～72h均增高，24h達高峰。與PH組比較，給予缺血再灌注損傷后NF-kB、STAT3、Cyclin D1 mRNA的表達在肝葉切除后明顯降低(p<0.05)。與IR組相比，給予缺血預(yù)處理后NF-kB、STAT3、Cyclin D1mRNA的表達在肝葉切除后明顯升高(p<0.05)，并促進STAT3、Cyclin D1mRNA提前表達。 結(jié)

12、論：(1)缺血預(yù)處理可降低缺血再灌注損傷后早期細胞因子TNF-α水平的過高表達，減輕缺血再灌注損傷。(2)缺血預(yù)處理促進缺血再灌注損傷后肝再生，可能與升高肝再生啟動子IL-6水平有關(guān)。(3)缺血預(yù)處理可升高肝大部切除合并缺血再灌注損傷后肝組織中NF-kB、STAT3、Cyclin D1mRNA的表達，促進缺血再灌注損傷后余肝肝再生，其機制可能與激活肝細胞再生TNF-α/IL-6/STAT3通路有關(guān)。(4)缺血預(yù)處理促進缺血再灌注損傷后肝