滑膜肉瘤融合基因分型及其與細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)性的研究.pdf

1、目的：研究SYT-SSX融合基因不同亞型在滑膜肉瘤中的表達(dá)情況，探討它們與滑膜肉瘤臨床病理資料的關(guān)系，并從蛋白質(zhì)水平研究不同融合基因類(lèi)型之間在某些細(xì)胞周期因子表達(dá)上的差異，從而為進(jìn)一步探索融合基因的作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：選取天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院1974-2005年收治的滑膜肉瘤患者中SYT-SSX融合基因表達(dá)陽(yáng)性的病例54例，提取石蠟包埋組織中的RNA，通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcripti

2、on-polymerase chain reaction，RT-PCR)檢測(cè)SYT-SSX亞型的表達(dá)，并比較SYT-SSX1、SYT-SSX2的表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。篩選和復(fù)查切片，選擇典型區(qū)域，并在相應(yīng)的蠟塊上標(biāo)記靶點(diǎn)。用組織芯片制作機(jī)在受體蠟塊上進(jìn)行打孔，制作組織芯片。使用免疫組織化學(xué)染色的方法檢測(cè)不同類(lèi)型融合基因Ki-67、CyclinD1、CDK4、p21、p27的表達(dá)情況。計(jì)數(shù)方法如下：選擇有代表性的10個(gè)高倍視野，每

3、個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞，使用陽(yáng)性細(xì)胞指數(shù)來(lái)評(píng)價(jià)整張切片的染色狀況。應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)所有結(jié)果進(jìn)行計(jì)數(shù)資料的正態(tài)性檢驗(yàn)、方差齊性檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)，比較這些細(xì)胞周期相關(guān)蛋白在SYT-SSX1和SYT-SSX2陽(yáng)性病例中的表達(dá)差異，并同時(shí)分析這些細(xì)胞周期蛋白之間的關(guān)系，以P<0.05，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： (1)54例滑膜肉瘤患者中，男性28例，女性26例，男女比例1.08:1，年齡9～70歲，平均年齡3

4、6.91歲，中位年齡33.00歲。最大徑1～29cm，平均最大徑7.25cm,中位值5.00cm。發(fā)生于四肢的患者為37例，軀干及近軀干部為17例，比例為2.18:1。研究顯示表達(dá)不同融合基因類(lèi)型的患者性別、年齡、腫瘤發(fā)生部位、腫瘤大小之間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 (2)54例滑膜肉瘤患者中，單相型患者33例，雙相型患者13例，分化不良者8例，以單相型多見(jiàn)(61.10％)。組織學(xué)分級(jí)為Ⅱ級(jí)和Ⅲ級(jí)的腫瘤分別為24例(44

5、.44％)和30例(55.56％)。54例患者中Ⅰ～Ⅱ期患者19例(35.19％)，Ⅲ～Ⅳ期患者35例(64.81％)。SYT-SSX1與SYT-SSX2在不同組織學(xué)類(lèi)型腫瘤中的表達(dá)具有顯著差異(P<0.05)，但與組織學(xué)分級(jí)、臨床分期之間無(wú)明顯關(guān)系(P>0.05)。 (3)54例滑膜肉瘤患者中SYT-SSX1與SYT-SSX2陽(yáng)性滑膜肉瘤患者Ki-67表達(dá)存在顯著差異(P<0.05)，前者的Ki-67陽(yáng)性指數(shù)明顯高于后者。

6、 (4)54例SYT-SSX1與SYT-SSX2陽(yáng)性滑膜肉瘤患者之間CyclinD1和CDK4表達(dá)存在顯著差異(P<0.05，P<0.05)，前者的CyclinD1和CDK4陽(yáng)性指數(shù)明顯高于后者。所有SYT-SSX1與SYT-SSX2陽(yáng)性滑膜肉瘤患者p21和p27表達(dá)存在顯著差異(P<0.05，P<0,05)，前者的p21和p27陽(yáng)性指數(shù)明顯高于后者。 (5)全部病例的CyclinD1表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞指數(shù)與CDK4、P21表達(dá)陽(yáng)

7、性細(xì)胞指數(shù)之間，p21與p27表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞指數(shù)都呈現(xiàn)線(xiàn)性相關(guān)(P<0.05)，但是CyclinD1表達(dá)與p27之間不呈現(xiàn)線(xiàn)性相關(guān)(P>0.05)。 結(jié)論： (1)組織學(xué)分型與不同的融合基因類(lèi)型具有明顯的相關(guān)性。SYT-SSX1型患者更多表現(xiàn)為雙相分化型滑膜肉瘤，而SYT-SSX2型患者則較多表現(xiàn)為單相分化，提示SYT-SSX1型融合基因可能促發(fā)某種機(jī)制而導(dǎo)致腫瘤干細(xì)胞向上皮方向分化； (2)SSX1型滑膜肉瘤患者