N-乙酰葡萄糖胺對(duì)皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞透明質(zhì)酸合成的影響.pdf

1、背景和目的：透明質(zhì)酸(Hyaluronic acid，HA)是天然存在于人體皮膚中的具有保水功能的聚合物，由葡糖醛酸和N-乙酰葡萄糖胺(又稱N-乙酰氨基葡萄糖，N-Acetylglucosamine，NAG)組成直鏈高分子多糖，作為吸水的大分子位于細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix，ECM)，廣泛存在于脊椎動(dòng)物結(jié)締組織和某些細(xì)菌內(nèi)。HA分子在溶液中高度伸展和隨機(jī)卷曲構(gòu)型使其占有很大區(qū)域，其流體動(dòng)力學(xué)體積較未水化時(shí)所占空

2、間大10倍，而且分子鏈之間相互纏繞形成連續(xù)的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，水分子通過極性鍵和氫鍵與其直接作用。使得HA像“分子海綿”一樣，可以吸收和保持其自身重量上千倍的水分，是國際上公認(rèn)的最好的保濕劑之一，具有維持細(xì)胞外間隙，并促進(jìn)離子溶質(zhì)和營養(yǎng)物質(zhì)的運(yùn)輸。除此之外，HA還可與蛋白結(jié)合成為分子量更大的蛋白多糖分子，分布在結(jié)締組織中的蛋白多糖，通過氨基多糖與水結(jié)合，這種HA-蛋白質(zhì)-水形成的凝膠將細(xì)胞粘合在一起，發(fā)揮正常的細(xì)胞代謝作用及組織保水作用，并保護(hù)

3、細(xì)胞不受病原菌侵害，防止感染，使皮膚具有一定的堅(jiān)韌性和彈性。年青健康的皮膚與含水量高密切相關(guān)，隨著年齡的增長，皮膚中水分減少，進(jìn)而彈性下降，光澤消退，皮膚粗糙衰老。研究表明真皮組織含水量與HA含量有直接關(guān)系。皮膚HA的含量在機(jī)體的器官中最高，占人體全部HA含量的50﹪。隨著對(duì)HA生理功能的深入研究，HA作為化妝品成分用于保養(yǎng)皮膚倍受重視。 皮膚中的HA主要由皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞產(chǎn)生，而NAG為HA合成原料之一，故本實(shí)驗(yàn)

4、以構(gòu)成人表皮的主要細(xì)胞角質(zhì)形成細(xì)胞(Human epidermal keratinocytes-adult，HEKa)作為切入點(diǎn)，研究外源性NAG對(duì)HEKa細(xì)胞HA合成的影響，及探討NAG影響HEKa細(xì)胞HA合成的分子機(jī)制。方法：采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)不同濃度NAG對(duì)HEKa細(xì)胞增殖的影響：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測(cè)不同濃度NAG對(duì)HEKa細(xì)胞HA合

5、成的影響；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse transcription-polymerase chain raction，RT-PCR)測(cè)定NAG對(duì)HEKa細(xì)胞透明質(zhì)酸合成酶(Hyaluronic acid synthetase．HAS)mRNA的影響，包括HAS1、HAS2和HAS3 mRNA，研究其作用的分子機(jī)制。 結(jié)果：MTT結(jié)果表明，低濃度的NAG(1mM/L、3mM/L和5mM/L)對(duì)HEKa細(xì)胞的增殖抑制無明顯影

6、響(P>0.05)，而10 mM/L的NAG顯著抑制HEKa細(xì)胞的增殖(P<0.05)；ELISA結(jié)果顯示，NAG呈劑量依賴性促進(jìn)HEKa細(xì)胞HA的生成(P<0.01)，最佳濃度為5mM/L：RT-PCR結(jié)果顯示，NAG對(duì)細(xì)胞HAS1和HAS2mRNA的表達(dá)無明顯作用，而1mM/L 和 5mM/LNAG上調(diào)HAS3mRNA的表達(dá)，10mM/L的NAG對(duì)HAS3mRNA的表達(dá)無明顯影響。 結(jié)論：(1)不同濃度NAG作用于HEKa