不同預(yù)處理方法對(duì)MSCs分泌的exosomes免疫調(diào)節(jié)功能影響的研究.pdf

1、目的：通過不同預(yù)處理手段干預(yù)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）在體外的培養(yǎng)微環(huán)境，研究微環(huán)境改變對(duì)MSC分泌的exosome在體內(nèi)外免疫調(diào)節(jié)作用的影響，以此來優(yōu)化MSC來源的exosome，使其具備更佳的免疫調(diào)節(jié)能力。
　　方法：體外實(shí)驗(yàn)部分：首先對(duì)MSC的體外培養(yǎng)環(huán)境分別進(jìn)行如下預(yù)處理：A組（正常培養(yǎng)組），B組（低氧預(yù)處理組），C組（IFN-γ預(yù)處理組），D組（IFN-γ+TNF-α聯(lián)合預(yù)處理組），收集上清中的exosome，比較不

2、同預(yù)處理組 exosome分泌量的差異；利用 CM-DiI標(biāo)記MSC分泌的exosome，觀察脾淋巴細(xì)胞攝取exosome的過程；在此基礎(chǔ)上通過體外MSC-exosome與脾淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)研究其對(duì) T淋巴細(xì)胞增殖，分化，相關(guān)細(xì)胞因子分泌的作用。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分：建立小鼠腳掌炎癥模型，分別注射不同預(yù)處理組來源的exosome，觀察 MSC分泌的exosome對(duì)體內(nèi)遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響。
　　結(jié)果：低氧預(yù)處理組、IFN-γ預(yù)處理組以及

3、 IFN-γ+TNF-α聯(lián)合預(yù)處理組 MSC分泌的exosome量均高于正常培養(yǎng)組（P<0.05），并且低氧預(yù)處理組 exosome的分泌量高于其他兩個(gè)預(yù)處理組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與對(duì)照組相比，正常培養(yǎng)組及各預(yù)處理組 MSC分泌的exosome均能明顯抑制 CD4+T淋巴細(xì)胞的增殖（P<0.01），但將各 exosome處理組對(duì) T淋巴細(xì)胞的增殖抑制率兩兩比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與對(duì)照組相比，各exoso

4、me處理組均能上調(diào)FOXP3的表達(dá)水平，增加Treg細(xì)胞的比例（P<0.05），其中 IFN-γ預(yù)處理組以及 IFN-γ+TNF-α聯(lián)合預(yù)處理組來源的exosome誘導(dǎo)CD4+T淋巴細(xì)胞向調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分化的作用較其它兩組更明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與對(duì)照組相比，各 exosome處理組均能促進(jìn) T淋巴細(xì)胞分泌更多的IL-4，IL-10（P<0.05），其中 IFN-γ預(yù)處理組的作用最顯著（P<0.01）。小鼠腳掌炎癥在體實(shí)

5、驗(yàn)中：與對(duì)照組小鼠相比，各 exosome處理組小鼠右后腳掌的腫脹程度明顯減輕（P<0.05），但各 exosome處理組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：MSC在低氧或炎癥細(xì)胞因子的刺激下，exosome的分泌量均增加，尤其是低氧刺激后，exosome的分泌量顯著增加。不同預(yù)處理來源的MSC-exosome均能有效抑制T淋巴細(xì)胞的增殖。炎性細(xì)胞因子預(yù)處理來源的MSC-exosome可明顯促進(jìn)Treg細(xì)胞的分化，