紅樹(shù)林土壤微生物鹵代酶基因和宏基因組非核糖體肽合酶基因的克隆和表達(dá).pdf

1、紅樹(shù)林是分布于熱帶、亞熱帶海岸的潮間帶的木本植物群落，是海灘上特有的森林類(lèi)型。紅樹(shù)林生態(tài)系統(tǒng)具有高生產(chǎn)率，高歸還率，高分解率的“三高”特點(diǎn)。微生物是紅樹(shù)林生態(tài)系統(tǒng)中重要的生物組成成份，它在紅樹(shù)林生態(tài)系統(tǒng)的能量物質(zhì)循環(huán)中起著關(guān)鍵的作用。由于紅樹(shù)林生態(tài)系統(tǒng)處于咸淡水交匯的特殊環(huán)境，兼具海洋與陸地的性質(zhì)，因而其中的微生物形成了獨(dú)特的生長(zhǎng)代謝調(diào)控機(jī)制和化學(xué)防御機(jī)制，其獨(dú)特的代謝產(chǎn)物也將成為我們獲取新型天然產(chǎn)物的資源寶庫(kù)。 首先，用不同的

2、針對(duì)鹵代酶基因設(shè)計(jì)的引物對(duì)分離自紅樹(shù)林土壤的放線(xiàn)菌進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)其中含有豐富的鹵代酶基因，且類(lèi)型多樣。由此推測(cè)這些放線(xiàn)菌具有產(chǎn)生類(lèi)型多樣的鹵代化合物的潛力。并對(duì)其中的幾個(gè)FADH2依賴(lài)型鹵代酶進(jìn)行表達(dá)，試圖闡明其催化機(jī)制，但一直無(wú)法實(shí)現(xiàn)可溶性表達(dá)。 在對(duì)分離自紅樹(shù)林土壤沉積物的放線(xiàn)菌進(jìn)行鹵代酶基因篩選時(shí)，發(fā)現(xiàn)MGR072菌株中的鹵代酶基因與Actinosynnema pretiosum subsp.Auranticum中鹵代酶基

3、因asm12的相似性為64％，另外用針對(duì)安莎類(lèi)抗生素起始合成酶AHBA合酶基因設(shè)計(jì)的引物對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)增，發(fā)現(xiàn)AHBA合酶基因擴(kuò)增結(jié)果為陽(yáng)性。綜合以上結(jié)果，推測(cè)其中含有合成安莎類(lèi)抗生素的生物合成基因簇，構(gòu)建了其基因組文庫(kù)，發(fā)掘出其中與安莎類(lèi)抗生素生物合成相關(guān)的約70Kb的基因簇。并對(duì)其培養(yǎng)條件進(jìn)行了初步的研究。 我們還構(gòu)建了含有至少260Mb紅樹(shù)林沉積物環(huán)境樣品DNA的沉積物宏基因組文庫(kù)，并利用序列同源性驅(qū)動(dòng)篩選方法對(duì)其中所含有的N