TLR4在C3H-HeJ小鼠軍團菌感染模型中的作用.pdf

1、目的：
　　 1．建立軍團菌感染的小鼠模型，探討TLR4與軍團菌感染的關(guān)系。
　　 2．通過比較TLR4蛋白及其信號轉(zhuǎn)導通路中相關(guān)細胞因子的表達，初步闡明TLR4在軍團菌感染中的作用機制。
　　 方法：
　　 1．TLR4基因突變型小鼠C3H/HeJ小鼠、C3H/HeN小鼠作為實驗動物，6-8周，每組8只，雌雄各半。設立C3H/HeJ染菌組、C3H/HeN染菌組、C3H/HeN對照組三個實驗組。C3H/H

2、eN對照組作為C3H/HeJ染菌組、C3H/HeN染菌組的共同對照組。染菌組氣管注射50ul1.2x107cfu/ml軍團菌菌懸液，對照組氣管注射50ul無菌生理鹽水，分別于染菌后12小時、24小時、48小時、72小時處死小鼠。
　　 2．處死小鼠前采集眼眶血約2ml，用流式細胞術(shù)檢測各組PBMCTLR4蛋白的表達量，分析三組各時間點TLR4蛋白表達水平的變化。處死小鼠后，取染菌組和對照組的小鼠每個時間點左肺上葉約0.02g固定

3、做病理切片；
　　 3．將剩余肺組織勻漿，用酶聯(lián)免疫吸附法檢測各組肺組織中TNF-α和IL-1β的含量。
　　 結(jié)果：
　　 ①C3H/HeJ小鼠和C3H/HeN小鼠進行生存實驗時，C3H/HeJ小鼠的病死率高于C3H/HeN小鼠，兩組的病死率未發(fā)現(xiàn)差異(x2=0.686，P=0.408)。肺組織病理切片顯示C3H/HeJ和C3H/HeN染菌組均有炎性細胞浸潤并出現(xiàn)肺泡血管出血現(xiàn)象，對照組未發(fā)現(xiàn)有炎癥反應。C3H

4、/HeJ染菌組、C3H/HeN染菌組和C3H/HeN對照組之間肺臟臟器系數(shù)差異有統(tǒng)計學意義（F=3.765，P=0.028），各個時間點之間差異沒有統(tǒng)計學意義（F=2.296，P=0.084）分組和時間點之間交互作用差異有統(tǒng)計學意義（F=3.509，P=0.004）。C3H/HeJ染菌組和C3H/HeN染菌組的臟器系數(shù)均高于C3H/HeN對照組。
　　 ②三組的TLR4蛋白水平表達有統(tǒng)計學差異（F=10.736，P<0.001）

5、，各個時間點差異有統(tǒng)計學意義(F=55.034，P<0.001)分組和時間點之問交互作用差異有統(tǒng)計學意義(F=8.094，P<0.001)。兩兩比較后，除C3H/HeN染菌組與C3H/HeN對照組差異無統(tǒng)計學意義外，其余各組間均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）?；蛲蛔冃∈驝3H/HeJ染菌組TLR4蛋白表達相對較低，在24小時達到高峰后下降;C3H/HeN染菌組及C3H/HeN對照組TLR4蛋白表達隨著時間的延長而下降。
　　 ③

6、C3H/HeJ染菌組、C3H/HeN染菌組、C3H/HeN對照組之問TNF-α濃度差異具有統(tǒng)計學意義（F=47.215，P<0.001），三組在4個時間點的比較也具有統(tǒng)計學差異（F=21.373，P<0.001），分組和時間點之間存在交互作用（F=2.816，P=0.021）。C3H/HeJ染菌組和C3H/HeN染菌組各個時間點TNF-α的分泌水平均高于C3H/HeN對照組，三組TNF-α濃度均在感染24小時達到高峰后開始下降。三組肺組

7、織IL-1β濃度差異具有統(tǒng)計學意義（F=64.566，P<0.001），各個時間點的比較也具有統(tǒng)計學差異（F=13.958，P<0.001），分組和時間點之問的交互作用有統(tǒng)計學意義（F=3.958，P=0.005）。C3H/HeJ染菌組IL-1β的分泌水平均高于另外兩組，C3H/HeJ染菌組和C3H/HeN染菌組的IL-1β濃度均在染菌后24小時達到高峰后開始下降，C3H/HeN對照組IL-1β的分泌水平隨著時間的延長而上升。
　

8、　 結(jié)論：
　　 ①C3H/HeJ小鼠和C3H/HeN小鼠進行生存實驗病死率沒有差異，染菌后肺組織均出現(xiàn)炎癥反應，提示二者對軍團菌的易感性相同。
　　 ②C3H/HeN染菌組PBMCTLR4蛋白的表達水平高于C3H/HeJ染菌組，C3H/HeN染菌組與C3H/HeN對照組的TLR4蛋白表達水平?jīng)]有差異，提示TLR4可能未參與軍團菌的抗感染作用。C31-/HeJ染菌組TLR4蛋白的表達水平于染菌24h后達到高峰，可能是其