毛頭鬼傘多糖制備工藝優(yōu)化及高分子量多糖結(jié)構(gòu)和免疫活性研究.pdf

1、毛頭鬼傘（Coprinus Comatus），俗稱雞腿菇，多糖是其主要活性成份之一，具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗腫瘤、降血糖、降血脂及抗氧化等多種功效。近些年，已有對毛頭鬼傘多糖的提取工藝、多糖結(jié)構(gòu)及生物活性等的研究報(bào)道，但利用傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝獲得的毛頭鬼傘多糖得率低，色深且易吸潮，不利于后期產(chǎn)品開發(fā)。本論文旨在將酶法輔助提取應(yīng)用于毛頭鬼傘子實(shí)體多糖的提取過程中，并對醇沉工藝進(jìn)行優(yōu)化，以獲得多糖得率高且性狀好的提取工藝，論文的研究結(jié)果對于規(guī)模化生

2、產(chǎn)毛頭鬼傘多糖以及相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)具有重要的應(yīng)用價(jià)值。本論文還分離得到了具有免疫活性的高分子量葡聚糖，對其一級結(jié)構(gòu)進(jìn)行了解析，為真菌多糖深度構(gòu)效關(guān)系的研究奠定了基礎(chǔ)。
　　 1.酶法提取及醇沉工藝優(yōu)化
　　 研究毛頭鬼傘子實(shí)體多糖的酶法輔助提取工藝，發(fā)現(xiàn)木瓜蛋白酶效果最佳。通過研究酶解溫度、酶解時(shí)間、酶量對多糖得率的影響，獲得了最佳提取工藝條件，即酶解溫度50℃、酶解時(shí)間7h、酶量1％。在醇沉工藝實(shí)驗(yàn)中，分別研究了濃縮方式

3、，洗滌次數(shù)，濃縮比和干燥方式對多糖得率及性狀的影響，獲得了最佳醇沉工藝條件，即采用蒸煮濃縮方式，濃縮比為1∶2，60％乙醇沉淀后再以60％乙醇洗滌1次，真空冷凍干燥。
　　 采用優(yōu)化工藝放大規(guī)模提取多糖，傳統(tǒng)水提法粗多糖得率為2.04％,木瓜蛋白酶酶法輔助提取粗多糖得率為2.96％，相對提高了45.1％，而且均具有刺激巨噬細(xì)胞釋放NO的作用，證明酶法輔助提取可以應(yīng)用于制備毛頭鬼傘子實(shí)體多糖。
　　 2.高分子量多糖的分離

4、純化，結(jié)構(gòu)鑒定
　　 毛頭鬼傘子實(shí)體粉末依次經(jīng)過沸水提取，超濾濃縮，40％醇沉，沉淀用55％乙醇洗滌3次，得到水溶性多糖CCP750K-40P組份，通過HPLC檢測為均一多糖，且具有刺激巨噬細(xì)胞釋放NO的作用。通過單糖組成分析，甲基化分析，NMR譜（一維:1H NMR譜，13C NMR譜，二維:COSY譜，TOCSY譜，HSQC譜，HMBC譜和NOESY譜）等方法，確定了均一多糖CCP750K-40P分子量為264×104 Da