補(bǔ)陽還五湯對(duì)缺氧損傷神經(jīng)干細(xì)胞BDNF、GDNF表達(dá)的影響.pdf

1、目的:觀察補(bǔ)陽還五湯對(duì)缺氧損傷神經(jīng)干細(xì)胞BDNF、GDNF表達(dá)的影響。
　　方法:⑴將原代培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞，隨機(jī)分為4組：空白組、模型組、補(bǔ)陽還五湯血清組、正常血清對(duì)照組，于培養(yǎng)的第2天，取四組培養(yǎng)細(xì)胞各12孔，每孔加入4％多聚甲醛室溫下固定30min，3%H2O2-0.1M PBS20min以去除內(nèi)源性過氧化物酶，正常羊血清封閉，37℃孵育1h。將四組各12孔細(xì)胞進(jìn)一步分成二個(gè)亞組，每個(gè)亞組六孔細(xì)胞，分別加入一抗(BDNF、GD

2、NF)，37℃孵育1h，經(jīng)生物素化二抗和辣根酶標(biāo)記鏈酶親和素各1h(37℃) DAB顯色，鏡下控制反應(yīng)時(shí)間，蒸餾水洗三次終止反應(yīng)。以上操作除滴加封閉液后勿洗外，其它各步驟之間均須用0.1M PBS(含0.3%TritonX-100)洗5min×3次。在40倍物鏡下觀察缺氧損傷后神經(jīng)干細(xì)胞的形態(tài)變化以及免疫反應(yīng)陽性物的分布。對(duì)于陽性反應(yīng)物的水平，則按每組6孔細(xì)胞，每孔細(xì)胞取5個(gè)互不重疊的視野，計(jì)算每個(gè)視野的陽性細(xì)胞數(shù)目。并用南京捷達(dá)DP8

3、01圖像分析系統(tǒng)，分別統(tǒng)計(jì)BDNF和GDNF蛋白表達(dá)的陽性面積，取平均值。并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:補(bǔ)陽還五湯血清干預(yù)1 d后Nestin、NF-200、GFAP單標(biāo)免疫細(xì)胞化學(xué)發(fā)現(xiàn)NF-200陽性細(xì)胞比例中實(shí)驗(yàn)組最高(66±7)％，與空白組和對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0．05)。補(bǔ)陽還五湯血清組BDNF