大鱗副泥鰍(Paramisgurnus dabryanus)與泥鰍(Misgurnus anguillicaudatus)的種類鑒別方法及雌核發(fā)育初步研究.pdf

1、大鱗副泥鰍(Paramisgurnus dabryanus)與泥鰍(Misgurnus anguillicaudatus)近緣，分別隸屬于鯉形目（Cypriniformes）、鰍科（Cobitidae）的副泥鰍屬（Paramisgurnus）和泥鰍屬（Misgurnus），外形相似且常常同域存在。在全國(guó)除青藏高原以外的淡水水域中均有分布，是我國(guó)淡水養(yǎng)殖的重要經(jīng)濟(jì)魚(yú)類。因二者營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，又是傳統(tǒng)的大眾消費(fèi)對(duì)象，近年國(guó)內(nèi)已經(jīng)興起了泥鰍的養(yǎng)殖

2、熱潮。而對(duì)于二者的純種、雜種還不能有效而簡(jiǎn)捷地區(qū)分，亟需建立一套完善準(zhǔn)確的方法，解決養(yǎng)殖群體混淆和出口檢驗(yàn)等問(wèn)題。兩種泥鰍雌性普遍大于雄性，但對(duì)于大鱗副泥鰍性別決定機(jī)制還不十分明確，因此有必要運(yùn)用人工誘導(dǎo)雌核發(fā)育技術(shù)，根據(jù)雌核發(fā)育二倍體的性比判斷兩種泥鰍的性別決定機(jī)制，旨在為誘導(dǎo)全雌化和良種選育提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
　　本研究分以兩種泥鰍為材料，運(yùn)用核外mtDNA和微衛(wèi)星結(jié)合擴(kuò)增手段，創(chuàng)建了種類鑒別和雜交種快速鑒定的方法。同時(shí)誘導(dǎo)了兩種

3、泥鰍人工雌核發(fā)育，根據(jù)后代雌雄比例分析，對(duì)二者的性別決定機(jī)制作出了評(píng)價(jià)。獲得的主要研究結(jié)果如下：
　?。?）發(fā)現(xiàn)兩種泥鰍固有的線粒體長(zhǎng)度差異，在 COXⅡ-tRNALys序列區(qū)，泥鰍的DNA堿基比大鱗副泥鰍多71個(gè)。設(shè)計(jì)引物對(duì) M/P（F:CCGCCCAGGAGTATTTTATG；R:TGGCATTTCATCAGGGGTG），獲得大鱗副泥鰍的擴(kuò)增條帶為214bp，泥鰍的為285bp。根據(jù)條帶的大小即可鑒定泥鰍還是大鱗副泥鰍，方法簡(jiǎn)

4、便、準(zhǔn)確。
　?。?）通過(guò)兩種泥鰍微衛(wèi)星標(biāo)記的相互跨種擴(kuò)增，找到了兩種泥鰍的特異性標(biāo)記：大鱗副泥鰍的標(biāo)記是Pda71，泥鰍的標(biāo)記是Mac287和Mac375。三對(duì)標(biāo)記在人工雜交種中也能有效擴(kuò)增，電泳條帶清晰，根據(jù)特異性條帶的有無(wú)可判斷純種和雜交種。結(jié)合先前設(shè)計(jì)的M/P引物，能夠準(zhǔn)確找出母本。因此，三個(gè)特異性位點(diǎn)可作為快速檢測(cè)兩種泥鰍雜交種的工具。
　?。?）對(duì)兩種泥鰍都成功誘導(dǎo)了雌核發(fā)育。對(duì)泥鰍雌核發(fā)育后代切片35尾，&nb

5、sp;全部為雌性，由此推測(cè)性別決定機(jī)制為雄性異配型即XX/XY型，與前人報(bào)道相符。對(duì)大鱗副泥鰍雌核發(fā)育后代切片47尾，雌性比例為93.62％，雌雄比例嚴(yán)重偏離1:1。因此推斷其性別決定機(jī)制可能亦為 XX/XY型。與前人研究結(jié)果不一致，有待進(jìn)一步研究
　　本研究開(kāi)發(fā)了區(qū)分泥鰍和大鱗副泥鰍的mtDNA標(biāo)記；結(jié)合微衛(wèi)星位點(diǎn)跨種擴(kuò)增技術(shù)，創(chuàng)建了完整的大鱗副泥鰍和泥鰍純種、雜種的鑒別方法。利用冷休克方法誘導(dǎo)成功大鱗副泥鰍和泥鰍的雌核發(fā)育，根