巢蛋白及NF-Κb P65在妊娠期甲亢大鼠子代腎臟中的表達(dá).pdf

1、目的:妊娠合并甲狀腺功能亢進(jìn)癥(hyperthyroidism，簡稱甲亢)的患病率高達(dá)0.2‰-2‰[1]。其過量的甲狀腺激素和多種甲狀腺自身抗體會(huì)通過胎盤[2]，造成早產(chǎn)、宮內(nèi)生長遲緩等發(fā)生率明顯增高，影響到胎兒的生長發(fā)育，進(jìn)而給子代各器官成熟造成嚴(yán)重的后果[3]。巢蛋白是第Ⅳ類中間絲的細(xì)胞骨架蛋白，在細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)的組裝和調(diào)節(jié)方面發(fā)揮重要作用[4]。近年研究表明，巢蛋白主要表達(dá)在分化成熟的腎臟足細(xì)胞的胞質(zhì)和初級(jí)足突中。氧化應(yīng)激、缺血缺

2、氧因素等會(huì)導(dǎo)致其含量降低[5]。細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子(nuclear factor kappa B，NF-κB)在調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)和速率方面發(fā)揮重要作用。NF-κB最主要的活化形式為NF-κBP65-P50組成的二聚體[6]。正常情況下，NF-κBP65只存在與胞質(zhì)中，細(xì)胞核內(nèi)很少表達(dá)。缺血缺氧、氧化應(yīng)激等因素可使NF-κB發(fā)生核轉(zhuǎn)位，使其在細(xì)胞核的含量增加[7]。通過測定妊娠合并甲亢大鼠子代腎臟巢蛋白和腎小管間質(zhì)細(xì)胞胞核中NF-κBP65

3、的表達(dá)，探討妊娠合并甲亢對(duì)子代腎臟的影響，進(jìn)而為子代腎臟疾病的預(yù)防和治療提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法:將雌性SD大鼠隨機(jī)分成正常對(duì)照組（N組）、輕度甲亢組(A組)和重度甲亢組（B組）。予A組及B組大鼠不同劑量的左甲狀腺素鈉灌胃制造甲亢模型，正常對(duì)照組灌等量的生理鹽水，連續(xù)灌胃21天。造模成功后按雌雄比例2∶1，與雄性SD大鼠合籠。大鼠受孕后繼續(xù)灌胃，直至分娩。觀察母鼠及仔鼠的一般性狀。測定仔鼠0天、21天及60天時(shí)體重(body

4、weight，BW)、腎臟重量（kidney weight，KW）及觀察仔鼠腎臟HE染色病理結(jié)構(gòu)。觀察21天透射電鏡腎臟超微結(jié)構(gòu)。測定仔鼠21天及60天甲狀腺功能、腎功能。應(yīng)用westernblot技術(shù)測定仔鼠三個(gè)時(shí)期足細(xì)胞中巢蛋白及腎小管間質(zhì)細(xì)胞胞核中NF-κBP65的表達(dá)含量。
　　 結(jié)果:
　　 1、母鼠的一般狀況與甲功
　　 1.1、母鼠的一般性狀
　　 輕度甲亢組的母鼠活動(dòng)量、飲食量及飲水量較正

5、常對(duì)照組稍增加，對(duì)外界刺激反應(yīng)敏感，大小便增多;重度甲亢組與較正常對(duì)照組比較，上述變化更明顯。
　　 1.2、母鼠甲狀腺功能
　　 隨著左甲狀腺素鈉劑量的增加，F(xiàn)T3、FT4呈明顯升高趨勢;TSH呈明顯下降趨勢。
　　 2、仔鼠一般狀況、甲狀腺功能及腎功能
　　 2.1、仔鼠一般性狀
　　 正常對(duì)照組的仔鼠發(fā)育良好，絨毛顏色為純白色且較豐滿。輕度甲亢組與重度甲亢組的仔鼠較正常對(duì)照組絨毛生長速度緩慢

6、，色澤發(fā)暗，每日飲食量及飲水量增加，且重度甲亢組仔鼠表現(xiàn)更為突出。
　　 2.2、仔鼠甲功的比較
　　 2.2.1、各組仔鼠甲功的比較
　　 21天時(shí)，輕度甲亢組和重度甲亢組中的仔鼠血清中FT3、FT4的含量較正常對(duì)照組升高，TSH較正常對(duì)照組降低，重度甲亢組中的仔鼠血清FT3、FT4較輕度甲亢組升高，TSH較輕度甲亢組減低。60天時(shí)輕度甲亢組仔鼠血清中FT3、FT4較正常對(duì)照組升高，血清中TSH的含量較正常對(duì)照

7、組減低，重度甲亢組仔鼠血清中FT3、FT4較正常對(duì)照組升高，血清TSH較正常對(duì)照組減低。重度甲亢組仔鼠血清中FT3、FT4較輕度甲亢組升高，TSH比輕度甲亢組減低。
　　 2.2.2、仔鼠不同時(shí)期甲功的變化
　　 正常對(duì)照組，60天時(shí)仔鼠血清中FT3、FT4與21天時(shí)比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。輕度甲亢組仔鼠60天時(shí)，血清FT3、FT4與21天時(shí)比較，呈現(xiàn)降低趨勢，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，血清TSH較21天時(shí)升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。重度甲亢組

8、60天時(shí)血清FT3、FT4與21天比較，呈現(xiàn)降低趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，血清TSH比21天時(shí)升高，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 2.3、仔鼠腎功能
　　 21天時(shí)，輕度甲亢組和重度甲亢組仔鼠血清BUN及Cr含量較正常對(duì)照組明顯增高，且重度甲亢組仔鼠血清中BUN及Cr含量較輕度甲亢組明顯增高。60天時(shí)，輕度甲亢組和重度甲亢組仔鼠血清中BUN及Cr含量較正常對(duì)照組明顯增高，重度甲亢組仔鼠血清BUN及Cr的含量較輕度甲亢組明顯升高。正常

9、對(duì)照組21天與60天比較，血清BUN及Cr無明顯的差別。輕度甲亢組60天與21天比較，血清BUN及Cr有明顯的升高的趨勢;重度甲亢組60天與同組21天比較，BUN及Cr有明顯升高的趨勢。
　　 3、仔鼠體重、腎臟總重量、HE染色及電鏡透射的結(jié)果
　　 3.1、仔鼠三個(gè)時(shí)期的體重的比較
　　 0天時(shí)，輕度甲亢組及重度甲亢組仔鼠體重較正常對(duì)照組明顯降低，重度甲亢組較輕度甲亢組體重低。21天時(shí)，輕度甲亢組及重度甲亢組仔

10、鼠體重較正常對(duì)照組低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，重度甲亢組較輕度甲亢組體重低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。60天時(shí)，輕度甲亢組及重度甲亢組仔鼠體重較正常對(duì)照組低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，重度甲亢組較輕度甲亢組體重低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.2、仔鼠三個(gè)時(shí)期腎臟總重量的比較
　　 0天時(shí)，輕度甲亢組及重度甲亢組仔鼠腎重較正常對(duì)照組低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，重度甲亢組較輕度甲亢組腎重低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。21天時(shí)，輕度甲亢組及重度甲亢組仔鼠體重較正常對(duì)照組低，具有統(tǒng)

11、計(jì)學(xué)意義，重度甲亢組較輕度甲亢組體重低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。60天時(shí)，輕度甲亢組及重度甲亢組仔鼠體重較正常對(duì)照組低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，重度甲亢組較輕度甲亢組體重低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.3、仔鼠腎臟HE染色結(jié)果
　　 正常對(duì)照組、輕度甲亢組及重度甲亢組仔鼠0天腎組織尚未發(fā)育完全，腎系膜細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞較少，腎小球體積較小，無明顯的差別。輕度甲亢組仔鼠21天與同期較正常對(duì)照組比較，腎小管及腎小球結(jié)構(gòu)稍紊亂，基底膜稍增厚，內(nèi)皮

12、細(xì)胞無水腫等異常;重度甲亢組21天腎組織排列異常紊亂，有大量紅細(xì)胞的浸潤，充血水腫較明顯，基底膜增厚明顯，基質(zhì)增多。輕度甲亢組60天腎組織纖維組織稍增生，纖維化較正常組同期明顯。內(nèi)皮細(xì)胞及系膜細(xì)胞水腫及體積增大。重度甲亢組60天腎組織纖維組織明顯增生，纖維化明顯。內(nèi)皮細(xì)胞及系膜細(xì)胞水腫及體積增大，大量炎性細(xì)胞的浸潤。
　　 3.4、仔鼠21天時(shí)腎臟透射電鏡結(jié)果
　　 正常組21天仔鼠腎小球足細(xì)胞結(jié)構(gòu)排列完整，足突排列清晰

13、整齊;輕度甲亢組21天仔鼠腎小球基底膜輕度增厚，且厚薄不均勻，毛細(xì)血管窗孔不均勻增大;重度甲亢組21天仔鼠腎臟足細(xì)胞明顯腫脹，足細(xì)胞線粒體鞘部分或大部分融合，部分膜融合或消失，系膜細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞腫脹明顯，系膜基質(zhì)增多，毛細(xì)血管孔窗徑明顯增加。
　　 4、仔鼠足細(xì)胞中巢蛋白的表達(dá)量
　　 0天時(shí)輕度甲亢組和重度甲亢組巢蛋白表達(dá)較正常對(duì)照組顯著降低，重度甲亢組較輕度甲亢組巢蛋白表達(dá)顯著降低。21天時(shí)輕度甲亢組和重度甲亢組巢蛋

14、白較正常對(duì)照組顯著降低，且重度甲亢組巢蛋白表達(dá)較輕度甲亢組顯著降低。60天時(shí)，輕度甲亢組和重度甲亢組巢蛋白較正常對(duì)照組顯著降低，60天時(shí)重度甲亢組巢蛋白較輕度甲亢組顯著降低。正常對(duì)照組仔鼠0天、21天和60天時(shí)，巢蛋白表達(dá)無明顯的差別。輕度甲亢組21天及60天巢蛋白表達(dá)較0天均明顯降低，60天時(shí)較21天時(shí)巢蛋白的表達(dá)明顯降低。重度甲亢組21天及60天巢蛋白表達(dá)較0天均明顯降低，60天較21天表達(dá)明顯降低。
　　 5、腎小管間質(zhì)細(xì)

15、胞胞核中NF-κBP65的表達(dá)量
　　 0天時(shí)輕度甲亢組和重度甲亢組NF-κBP65表達(dá)較正常對(duì)照組顯著增高，重度甲亢組較輕度甲亢組NF-κBP65表達(dá)顯著增高。21天時(shí)輕度甲亢組和重度甲亢組NF-κBP65較正常對(duì)照組顯著增高，且重度甲亢組NF-κBP65表達(dá)較輕度甲亢組顯著增高。60天時(shí)，輕度甲亢組和重度甲亢組NF-κBP65較正常對(duì)照組顯著增高，60天時(shí)重度甲亢組NF-κBP65較輕度甲亢組顯著增高。正常對(duì)照組仔鼠0天、2

16、1天和60天時(shí)，NF-κBP65表達(dá)無明顯的差別。輕度甲亢組21天及60天NF-κBP65表達(dá)較0天均明顯增高，60天較21天表達(dá)明顯增高。重度甲亢組21天及60天NF-κBP65表達(dá)較0天均明顯增高，60天較21天表達(dá)明顯增高。
　　 結(jié)論:
　　 1、母鼠妊娠期間患有甲狀腺功能亢進(jìn)癥，會(huì)造成對(duì)子代甲狀腺功能亢進(jìn)。且甲亢嚴(yán)重程度與子代腎臟損傷成正相關(guān)。輕度甲亢會(huì)隨著時(shí)間的推移，會(huì)恢復(fù)正常。重度甲亢隨著時(shí)間的推移，甲狀腺