腸炎沙門氏菌實驗感染鴨病理學及免疫組化與免疫熒光抗原定位方法的建立和應用研究.pdf

1、腸炎沙門氏菌(SalmonellaEnteritidis，SE)是一種人、獸和禽類共患的傳染病病原，其對食品的污染是引起人食物中毒和患急性胃腸炎的主要原因，已成為世界公共衛(wèi)生關注的一個重要課題。中國是世界上鴨的飼養(yǎng)量和消費量最大的國家，而腸炎沙門氏菌感染是嚴重危害養(yǎng)鴨業(yè)的重要傳染病。鑒于此，本文圍繞鴨腸炎沙門氏菌人工感染疾病模型病理學、抗原定位的免疫組化與免疫熒光方法的建立及其細菌侵染規(guī)律等展開系統(tǒng)研究，以期系統(tǒng)地了解SE的入侵方式和復

2、制機理，為闡明鴨腸炎沙門氏菌的發(fā)病機制及鴨腸炎沙門氏菌病的實驗室診斷提供關鍵的實驗數(shù)據(jù)。結(jié)果如下： 1.腸炎沙門氏菌實驗感染鴨臨床癥狀和臨床病理學 本研究采用皮下、口服和滴鼻3種途徑感染7日齡雛鴨，成功復制了腸炎沙門氏菌感染鴨的病理模型。通過臨床觀察發(fā)現(xiàn)，三個感染途徑的雛鴨均出現(xiàn)以下眼觀病變：皮下無明顯出血，心肌出血，心冠脂肪出血，心包積液，表面有纖維素性滲出；肝臟腫大，色暗紅、充血、出血，有些病例的肝臟有灰白色壞死點，

3、表面有纖維素性滲出;腎臟腫大充血：腸道出血，其它未見明顯異常。 2.腸炎沙門氏菌實驗感染鴨組織病理學 用腸炎沙門氏菌(SCD1株)感染雛鴨復制腸炎沙門氏菌急性病例，分別于接種后不同時間，取心、肝、腎、脾、胸腺、十二指腸、空腸、回腸、法氏囊和腦組織等制作病理切片。病理切片觀察結(jié)果表明：SE感染宿主后，可見其肝、腎、心等實質(zhì)器官出血，細胞變性、壞死，肝索與肝索以及腎小管之間的間質(zhì)中有淋巴細胞浸潤；脾白髓內(nèi)淋巴細胞崩解、消失；

4、法氏囊濾泡內(nèi)淋巴細胞明顯減少：腸道出血，固有層有大量淋巴細胞浸潤。 3.腸炎沙門氏菌致實驗感染鴨超微病理學： 用腸炎沙門氏菌(SCD1株)感染雛鴨復制腸炎沙門氏菌急性病例，分別于接種后不同時間，取心、肝、腎、脾、胸腺、十二指腸、空腸、回腸、法氏囊和腦等組織制作超薄切片。電鏡觀察結(jié)果表明：SE感染宿主后，超微結(jié)構(gòu)變化最早發(fā)生于空腸、回腸、脾和肝，而鴨死亡后以免疫器官和消化器官損傷最嚴重。各種組織細胞主要為腫脹壞死，染色質(zhì)濃

5、縮、碎裂或溶解，線粒體腫脹，嵴斷裂、溶解至呈空泡樣結(jié)構(gòu)；同時脾、法氏囊以及小腸固有層中的淋巴細胞在感染24h后出現(xiàn)壞死的同時還出現(xiàn)較為明顯的凋亡變化；而鴨死亡后淋巴細胞主要表現(xiàn)為整個細胞凝聚深染，染色質(zhì)固縮，細胞膜模糊或不完整。 4.免疫熒光檢測石蠟切片中鴨腸炎沙門氏菌方法的建立及應用于實驗感染鴨組織抗原定位的研究 4.1免疫熒光檢測石蠟切片中鴨腸炎沙門氏菌方法的建立 以鴨源致病性腸炎沙門氏菌(SE)為抗原免疫兔

6、制備兔抗SE高免血清，并以High-Q離子交換層析純化獲得兔抗.SE-IgG，建立了免疫熒光(IFA)檢測感染鴨石蠟組織切片中SE的方法。 4.2免疫熒光檢測鴨腸炎沙門氏菌實驗感染鴨組織抗原定位及其侵染規(guī)律的研究 應用建立的免疫熒光檢測方法對實驗感染鴨只的各器官進行檢測，并對體內(nèi)抗原的動態(tài)分布進行研究，結(jié)果表明：接種8h后的不同時間，在心臟、肝臟、脾臟、腎臟和腸道組織中口服和皮下攻毒組均可檢測到腸炎沙門氏菌抗原，滴鼻組在

7、哈氏腺中偶爾能檢測到，抗原均位于陽性細胞的細胞質(zhì)中。經(jīng)IFA檢出的時間順序，皮下組：心臟、脾臟、空腸、回腸＞盲腸、肝臟、腎＞十二指腸＞哈氏腺，法氏囊＞腦＞直腸＞肺；口服組：空腸、回腸、脾臟＞心臟、肝臟、盲腸、腎臟＞腦＞哈氏腺、法氏囊、十二指腸＞胸腺、直腸，且在這兩個實驗組中，心臟、肝臟、脾臟、腎臟、空腸、回腸和盲腸中一直都能夠檢測到腸炎沙門氏菌抗原，表明心臟、肝臟、脾臟、腎臟、空腸、回腸和盲腸是腸炎沙門氏菌侵染的主要靶器官。 5

8、.免疫組化檢測石蠟切片中鴨腸炎沙門氏菌方法的建立及應用于實驗感染鴨組織抗原定位的研究 5.1免疫組化檢測石蠟切片中鴨腸炎沙門氏菌方法的建立 以鴨源致病性腸炎沙門氏菌(SE)為抗原免疫兔制備兔抗SE高免血清，并以High-Q離子交換層析純化獲得兔抗SE-IgG，建立了免疫組化(IIS)檢測感染鴨石蠟組織切片中SE的方法。 5.2免疫組化檢測鴨腸炎沙門氏菌實驗感染鴨組織抗原定位及其侵染規(guī)律的研究應用建立的方法對實驗感

9、染鴨只的各器官進行檢測，并對體內(nèi)抗原的動態(tài)分布進行研究，結(jié)果表明：接種8h后的不同時間段，在心臟、肝臟、脾臟、腎臟和腸道組織中口服和皮下攻毒組均可檢測到鴨腸炎沙門氏菌抗原，滴鼻組在哈氏腺中偶爾能檢測到；部分死亡雛鴨的肺臟中可檢測到抗原，抗原均位于陽性細胞的細胞質(zhì)中。經(jīng)IIS檢出的時間順序，皮下組：心臟、脾臟、回腸、空腸＞盲腸、肝臟、腎＞十二指腸＞哈氏腺，法氏囊＞腦＞直腸＞肺；口服組：空腸、回腸、脾臟＞心臟、盲腸、肝臟、腎臟＞腦＞哈氏腺、