下咽癌FADU細(xì)胞系中CD133陽(yáng)性細(xì)胞的基礎(chǔ)研究.pdf

1、[研究背景與目的]
　　 下咽癌是一種頭頸部惡性腫瘤,是上消化道及上呼吸道惡性程度最高的腫瘤之一,其發(fā)生的機(jī)制并不清楚。預(yù)后差的主要因?yàn)榘ň植繌?fù)發(fā)、易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。由于臨床后果差,對(duì)患者生命及生活質(zhì)量影響嚴(yán)重,是當(dāng)前耳鼻咽喉.頭頸外科的研究重點(diǎn)。
　　 腫瘤干細(xì)胞是近年來(lái)對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程的一種新的理論觀點(diǎn),新觀點(diǎn)認(rèn)為腫瘤組織中只有極少量的腫瘤細(xì)胞有干細(xì)胞樣作用,它們是一群數(shù)量較少但具有無(wú)限自我更新潛能并能

2、促使腫瘤形成的細(xì)胞,在腫瘤生長(zhǎng)中起著決定性作用。這類(lèi)細(xì)胞有較強(qiáng)的抗拒放療及化療的作用,并可能與免疫逃逸,生長(zhǎng)信號(hào)異常傳遞等多種腫瘤的重要生物學(xué)特點(diǎn)有關(guān)。目前已從腦腫瘤,白血病,乳腺癌,喉癌,肺癌等多種腫瘤組織中提取到了腫瘤干細(xì)胞,并進(jìn)行了相關(guān)細(xì)胞學(xué)及分子生物學(xué)研究。從當(dāng)前的研究結(jié)果來(lái)看,不同的腫瘤中,盡量其腫瘤干細(xì)胞生物學(xué)特性有共同點(diǎn),如無(wú)限自我更新潛能,分化能力等,但腫瘤干細(xì)胞其表面標(biāo)志物是不盡相同的,這提示我們需要對(duì)不同的腫瘤進(jìn)行相

3、應(yīng)研究,了解不同腫瘤中腫瘤干細(xì)胞的標(biāo)志物特點(diǎn)。
　　 近年來(lái),許多研究證實(shí),CD133是腫瘤干細(xì)胞的重要標(biāo)志物之一。CD133是一種分子量為120 kDa,具有5個(gè)跨膜區(qū)的糖蛋白,屬于一種早期抗原。在2000年英國(guó)舉行的第7屆國(guó)際人類(lèi)白細(xì)胞分化抗原研討會(huì)上被正式命名為CD133。它是一種正常的造血干細(xì)胞表面標(biāo)志物,它的一個(gè)顯著特點(diǎn)就是:CD133的表達(dá)隨著細(xì)胞的分化迅速下調(diào),選擇性地在骨髓和外周血造血干細(xì)胞及內(nèi)皮祖細(xì)胞表達(dá),但在

4、成熟內(nèi)皮細(xì)胞上不表達(dá),是一個(gè)重要的分離和鑒定造血干或祖細(xì)胞的分子標(biāo)志。
　　 侵襲能力是惡性腫瘤的標(biāo)志性行為特點(diǎn)之一,是當(dāng)前研究惡性腫瘤行為特點(diǎn)的一個(gè)重要方向。目前利用Transwell小室是體外研究腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移行為的簡(jiǎn)便且快速的方法。
　　 本研究擬以CD133為分選標(biāo)志物,從人類(lèi)FADU細(xì)胞系中分選出CD133陽(yáng)性細(xì)胞,研究其數(shù)量分布特點(diǎn),形態(tài)學(xué)特點(diǎn),并擬通過(guò)應(yīng)用Transwell小室的研究方法,研究在FADU

5、細(xì)胞系中CD133陽(yáng)性細(xì)胞的侵襲能力,從而為未來(lái)完善對(duì)CD133陽(yáng)性細(xì)胞擁有的細(xì)胞學(xué)特點(diǎn)研究提供相應(yīng)的細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)。
　　 第一部分
　　 下咽癌FADU細(xì)胞系中CD133表達(dá)情況研究
　　 [目的]研究下咽癌FADU細(xì)胞系中CD133表達(dá)情況。
　　 [方法]對(duì)下咽癌FADU細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)和傳代,分別應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)和流式細(xì)胞儀的方法對(duì)下咽癌FADU細(xì)胞系中CD133表達(dá)情況進(jìn)行研究。
　　

6、[結(jié)果]免疫細(xì)胞化學(xué)的方法發(fā)現(xiàn),在下咽癌FADU細(xì)胞中CD133陽(yáng)性細(xì)胞僅占少數(shù),而在利用流式細(xì)胞儀的方法研究后發(fā)現(xiàn),FADU細(xì)胞中CD133陽(yáng)性細(xì)胞比例僅為2.01％。
　　 [結(jié)論]CD133陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量在FADU細(xì)胞系中占少數(shù)。
　　 第二部分
　　 下咽癌FADU細(xì)胞系中CD133陽(yáng)性細(xì)胞的分選
　　 [目的]應(yīng)用可靠的分選手段,從下咽癌FADU細(xì)胞系中分選CD133陽(yáng)性細(xì)胞并鑒定。
　　

7、 [方法]對(duì)下咽癌FADU細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)和傳代,應(yīng)用免疫磁珠分選技術(shù)進(jìn)行CD133陽(yáng)性細(xì)胞的分選。
　　 [結(jié)果]應(yīng)用免疫磁珠分選技術(shù)后,可很好地分選出CD133陽(yáng)性細(xì)胞,其分選后CD133陽(yáng)性細(xì)胞純度可達(dá)91.2％。
　　 [結(jié)論]免疫磁珠分選技術(shù)可很好地應(yīng)用于下咽癌FADU細(xì)胞系中CD133陽(yáng)性細(xì)胞的分選。
　　 第三部分
　　 下咽癌FADU細(xì)胞系中CD133陽(yáng)性細(xì)胞的侵襲能力研究
　　 [目

8、的]研究下咽癌FADU細(xì)胞系中CD133陽(yáng)性細(xì)胞的侵襲能力。
　　 [方法]對(duì)應(yīng)用免疫磁珠分選技術(shù)進(jìn)行分選后的CD133陽(yáng)性細(xì)胞、陰性細(xì)胞分別應(yīng)用Transwell小室進(jìn)行侵襲能力研究,倒置相差顯微鏡下照相,計(jì)數(shù)遷移到上室基質(zhì)膜外表面的細(xì)胞數(shù)目,以能穿過(guò)基質(zhì)膜的細(xì)胞數(shù)目多少表示細(xì)胞的侵襲能力強(qiáng)弱。每個(gè)樣本計(jì)數(shù)5個(gè)視野(×200)的細(xì)胞數(shù),取其平均值進(jìn)行比較。
　　 [結(jié)果]與CD133陰性細(xì)胞相比,CD133陽(yáng)性細(xì)胞透膜